Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
Исследования могут производиться как обычно, при освещении по методам светлого и темного полей проходящим и падающим светом.
Однако поле зрения всегда выглядит темным, что характерно также и для освещения по меюду светлого поля, так как и при этом поглощается свет, которым освещается препарат.
Интенсивность облучения препарата выше при освещении по методу светлого поля, вследствие чего ему и отдается предпочтение.
Для поглощения всех осветительных лучей и во избежание флуоресценции в глазах наблюдателя необходимы заграждающие фильтры, которые надеваются на окуляр. Они представляют собой желтый или оранжевый фильтры, которые поглощают все синле, фиолетовые и ультрафиолетовые лучи.
При применении освещения по методу темного поля заграждающие фильтры на окуляре излишни, так как в глаза попадает лишь свет, рассеянный объектом, а поле зрения с самого начала темное.
При флуоресцентной микроскопии наибольшее внимание необходимо уделять источнику света.
Источники света
1. Для некоторых исследований из света, даваемого сильным осветителем микроскопа, выделяется видимая синяя часть спектра, которая используется для облучения препаратов.
Заграждающий фильтр на окуляре должен быть особенно строго подобран, в противном случае будет виден
Рис. 277. Сравнение гистологических препаратов легкого собаки, отравленной монойодуксусной кислотой (из Гайтингера «Флюоресцентная микроскопия»),
а — препарат, окрашенный тиофлавином (С) и метиловым зеленым пря флюоресцентной микроскопии ; структура альвеол легкого — голубая, белок — коричневый, опорные ткани — желтые ; б — препарат, окрашенный гематоксилин-эозином в обыкновенном свете.
Рис. 278. Ядра, эндотелия и тучные клетки из брыжейки крысы (Г-ирт). Масштаб изображения 1890 : 1 (по снимку Народного предприятия Карл Цейсс в Йене).
Рис. 279. Поперечный срез молодого ствола барбариса (Штруггер). Масштаб изображения 100:1 (по снимку Народного предприятия Карл Цейсс в Йене).
Рис. 280. Нервные волокна в брыжейке лягушки после внутрибрюшинной инъекции трйпофлавина (Гирт). Масштаб изображения 1050 : 1 (по снимку Народного предприятия Карл Цейсс в Йене).
Рис. 281. Пучок кристаллов берберин-ро-данида (Штруггер). Масштаб изображения 200 : 1 (по снимку Народного предприятия Карл Цейсс в Йене).
Рис. 282. Большой флуоресцентный микроскоп Народного предприятия Карл Цейсс в Йене с насаженной на микроскоп малоформатной
камерой.
синий свет. Правда, яркость флуоресценции при применении обычных осветителей к микроскопу незначительна и достигает лишь 1/ю — Vго яркости, получаемой в большом флуоресцентном микроскопе. Вследствие этого такая методика непригодна при исследованиях в падающем свете. Препараты, флюорохромированные аурамином по Хагеманну. особенно хорошо реагируют на возбуждение синим свеюм (см. выше
о флюорохромпровании туберкулезных бацилл).
2. Для получения ультрафиолетовых лучей можно употреблять специальные осветители с ртутно-кварцевой лампой.
Это освещение достаточно также п для микроскопии в падающем свете.
3. Однако для больших научно-исследовательских работ обыкновенно используют угольную дуговую лампу или Ртутную лампу сверхвысокого давления. С ними возможно проведение всех способов освещения.
Рис. 283. Большой флуоресцентный микроскоп (схематически).
1 — источник света (угольная дуговая лампа); 2 — задняя часть кварцевого коллектора ; 3 — кювета с 4% раствором сернокислой меди; 4 — диафрагма поля осветителя , 5 — передняя часть кварцевого коллектора, отбрасывающего изображение источника света на пластинку из уранового стекла (9); 6 — > льграфиолотовые фильтры, поглощающие весь видимый свет; 7 — держатель фильтров для микрофотографии и работы при освещении падающим светом , 8 — кварцевая призма; 9 — плчс-тпнка из уранового стекла, служащая для юстировки освещения; 10 — кварцевый конденсор; 11 — нормальный объектив; 12 — нормальный окуляр; 13 — заграждающий фильтр, пропускающий лишь видимый свет и поглощающий ультрафиолетовый свет; 14 — плита-подставка камеры; 15 — деревянный ящик, на котором *. стоит микроскоп.
Рис. 284. Ультрафиолетовый осветитель с трансформатором Народного предприятия по производству медицинских приборов в Берлине-
Рис. 285. Флуоресцентный осветитель Лейтца CS150 для применения с микроскопом Лейтца-«Ортолюкс». CS150 снабжен ртутной лампой сверхвысокого давления.
Рис. 286. Осветитель для флуоресцентного микроскопа фирмы Цейсс-Винкель с Диафрагмой поля и фильтродержа-телем. Осветитель снабжен ртутнокварцевой лампой высокого давления Ханауско-го общества по производству кварцевых ламп.
Рис. 287. Большое флуоресцентное устройство «Люьс UV» фирмы
Рейхерт в Вене.
Из излучения источников света, упомянутых в пунктах 2 и 3, с помощью фильтров выделяют свет с необходимой длиной волны. Для этих целей прежде всего служит 1—4% раствор сернокислой меди или соответствующий стеклянный фильтр, благодаря чему поглощаются все красные и инфракрасные лучи. Для того чтобы раствор сернокислой меди действовал, он всегда должен быть свежим. Кроме того, на пути лучей вводится ультрафиолетовый или голубой фильтр, который должен иметь различную плотность в зависимости от препарата. Такие фильтры поглощают весь свет, кроме лучей с длиной волны 300—400 мр или, в зависимости от обстоятельств, — 300—500 мр, и незначительной части видимых фиолетовых лучей, что, однако, не мешает наблюдению.
