Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
з обычной концентрации.
Эмбриональные экстракты. Эмбриональные экстракты при добавлении их в питательные среды являются источниками витаминов, факторов роста и других элементов, необходимых для роста клеток. Кроме того, эмбриональные экстракты 'применяют при приготовлении плазменных культур для свертывания плазмы.
Обычно употребляют куриный, коровий и человеческий эмбриональные экстракты.
Куриный эмбриональный экстракт готовят из эмбрионов 7—
11 -дневного возраста. Зародыши эмбрионов извлекают, голову его отсекают, а тело растирают в фарфоровой ступке, измельчают в гомогенизаторе или до образования однородной кашицеобразной массы встряхивают во флаконе со стеклянными бусами. Затем, в зависимости от возраста эмбриона, на каждый эмбрион добавляют 1 или 1,5 мл раствора Хэнкса или амниотической коровьей жидкости.
Полученную суспензию разливают в пробирки, дважды замораживают и оттаивают, затем центрифугируют при 2000 об/мин 15 минут. Надосадочную жидкость собирают в стерильные пробирки, проверяют на стерильность и хранят в замороженном состоянии под резиновой пробкой.
Некоторые рекомендуют выдерживать суспензию эмбрионов при 37е в течение 30 минут, а потом центрифугировать при 3000 об/мин 30 минут. В связи с тем что куриный эмбриональный экстракт способствует иногда появлению жировых гранул в культурах фибробластов, Лединко, Риордан и Мельник (1952) предложили шолучение эмбрионального экстракта путем экстраги-
рования ацетоном. После измельчения зародыша на каждый эмбрион прибавляют 0,5 мл физиологического раствора, а затем охлажденный до 4° ацетон в 5-кратно.м отношении к весу эмбрионов. Контакт с ацетоном (при 4° длится 30 минут). По истечении этого времени суспензию фильтруют через воронку Бухнера под вакуумом. После 4 экстракций к суспензии прибавляют свежую порцию ацетона и оставляют на 1—2 часа при 4°, затем центрифугируют 10 минут при 2000 об/мин. Ацетон удаляют полностью. К осадку прибавляют раствор Хэнкса в полуторном отношении к весу эмбрионов и оставляют на 24 часа при 4°. Затем 20 минут центрифугируют при 2500 об/мин. Надосадочную жидкость разливают по .пробиркам и хранят в замороженном состоянии.
Коровий эмбриональный экстракт готовят следующим образом. У стерильно извлеченного коровьего эмбриона (после отсоса амниотической жидкости из матки) отделяют мышцы и внутренние органы. Все отобранные ткани промывают троекратно в растворе Хэнкса с добавлением антибиотиков, взвешивают и смешивают с равным количеством раствора Хэнкса или коровьей амниотической жидкости, после чего измельчают в стерильном .гомогенизаторе, ступке или флаконе с бусами.
Полученную суспензию собирают в центрифужные пробирки, помещают их на 30 минут в термостат (37°), затем дважды замораживают и оттаивают. После этого 20 минут центрифугируют при 2500 об/мин. После центрифугирования надосадочную жидкость разливают в стерильные пробирки с резиновыми пробками и хранят в замороженном состоянии.
Перед использованием эмбриональные экстракты центрифугируют 5 минут три 2500 об/мин.
Человеческий эмбриональный экстракт готовят из эмбрионов человека 7—11-недельного возраста. Способы приготовления и хранения такие же, как и описанные выше.
ПРОПИСИ ОСНОВНЫХ ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД ИЗ ЕСТЕСТВЕННЫХ КОМПОНЕНТОВ
1. Среда Эндерса (Enders, 1953) для культивирования фибробластов и эпителиальных клеток.
Коровья амниотическая жидкость .... 85%
Коровий эмбриональный экстракт .... 10%
Лошадиная сыворотка .................... 5%
2. Среда 27 [Барский, Суза и 'др. (Barski, Souza et al., 1953)] для культивирования фибробластов человека и клеток тестикулярной ткани обезьяны.
Сыворотка человека.....................20%
Коровий эмбриональный экстракт .... 10%
Коровья амниотическая жидкость .... 45%
Раствор Хэнкса ........................ 25%
3. Среда 4t (Барский, Суза и .др., 1953) для поддержания выросших культур, зараженных вирусом.
Коровья амниотическая жидкость.........70%
Ультрафильтрат коровьей сыворотки . . . 15%
Раствор Хэнкса ........................15°/о
4. Среда (Шерер, Сив^ртон, Гей, 1953) для культивирования клеток HeLa.
Сыворотка человека......................50%
Раствор Хэнкса .................................48%
Куриный эмбриональный экстракт.........................2%
5. Среда [Дайнхац>дт, Гвнли (Deinhardt, Henle, 1956)] для культивирования клеток почек обезьяны.
Лошадиная сыворотка ..................6 частей
Куриный эмбриональный экстракт ... 3 части Раствор Эрла .........................8 частей
6. Среда (Шерер, Сивертон, 1953) для культивирования клеток почечной и тестикулярной ткани обезьяны.
Ультрафильтрат коровьей сыворотки . ] част!.
Раствор Хэнкса.............................2 части
