Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Биологическое испытание воды второй перегонки, полученной в чешских аппаратах, показало возможность лишь ограниченного ес использования. Клетки почечной ткани обезьян в растворе гидролизата лактальбумина, приготовленного на этой воде, достигли нормального развития только на 14-й день, тогда как клетки в контрольных матрасах нормально развивались уже к 7-му дню. Следовательно, использовать эту воду при изготовлении сред для культур тканей едва ли целесообразно ввиду медленного развития клеток.
О качестве дистиллированной воды можно судить по ее электропроводности.
Приемлемой может считаться вода, обладающая электропроводностью, равной 1,5—2,0-10-6 обратных омов.
Дистиллированную воду, используемую для приготовления питательных сред и растворов, нужно подвергать периодически химическому анализу и регулярно проверять на электропроводность.
ПРОПИСИ РАЗЛИЧНЫХ РАСТВОРОВ
Ниже мы приводим прописи различных растворов, применяющихся при культивировании тканей для различных целей.
Раствор Тироде (Tyrode, 1910). Предложен для культивирования тканей.
NaCI ....................8,0 г
КС1 .....................0,2 »
СаСЬ ....................0,2- »
MgCl2.6H20 ..............0,1 »
NaHjPOi .................0,05 »
Глюкоза .................1,0 »
NaHCOs ..................1-0 »
(на 1 л дважды дистиллированной | воды)
Реакцию среды доводят до 7,0 с помощью раствора соды (ЫаНСОз). В процессе работы pH можно довести до 7,2—7,4. В раствор иногда добавляют 0,002|0/о фенолового красного в качестве индикатора концентрации водородных ионов. Раствор стерилизуют фильтрацией и хранят при 4—6° в течение месяца.
Фосфатный буферный раствор. Предложен Делбекко и Фогт (Dulbecco, Vogt, 1954); нашел широкое применение в работе с однослойными культурами клеток. Раствор входит в состав питательной среды, используемой для получения бляшек по Делбекко. Нго применяют для промывания кусочков тканей при подготовительных операциях перед трипсинизацией.
Буферный раствор готовят из двух растворов — А и Б, которые стерилизуют отдельно и смешивают непосредственно перед употреблением.
Раствор А
NaCl . . .
KCI . . . .
Na2HP04 ¦ 2HeO KH2P04 . . .
8,0 г 0,2 * 1,42 » 0,2 »
(воды бидистиллироваиной, перегнанной б стекле до 500 мл)
Раствор Б
CaClj . . MgClj • 6HsO
. . 0,1 г . . 0,1 ,»
(воды бидистиллироваиной, перегнанной в стекле до 500 мл)
Полученные растворы фильтруют через бумажный или ватно марлевый фильтр и стерилизуют текучим паром при темперarypi 100° без давления, по 20 минут 3 дня подряд. Перед использова нием растворы сливают в равных объемах. Соединенные растворь хорошо перемешивают. Концентрация водородных ионов раствор; должна быть 7,4—7,5,
При хранении pH буферного раствора изменяется, поэтом] хранят растворы А и Б отдельно.
Срок годности растворов А и Б один месяц.
Буферный раствор Гея (Gey G., Gey М., 1936).
Раствор в процессе приготовления стабилизуют доведением р1~ до 7,0 с помощью раствора соды. При необходимости добавление! раствора соды pH раствора доводят до 7,4.
В раствор может быть добавлен феноловый красный в кои центрации 0,002%. Стерилизуют раствор фильтрацией.
Хранят раствор при температуре 4—6° в течение месяца.
Растворы Симмса (Simms, Sanders, 1942). Предложено «е сколько солевых растворов, получивших следующие названия Симмс Х7, Симмс Х6, Симмс Z, Симмс ZI6. Эти растворы приме няются для промывания и культивирования тканей.
Б табл. 4 приводим прописи этих солевых растворов из рас чета на 1 л дважды дистиллированной воды.
Раствор Симмса Z16 чаще применяется как жидкость для раз ведения, так как он не содержит солей кальция, необходимы} для роста клеток.
Глюкоза
NaHCOs
NaCl
KCI
CaCh
MgCl*
Na2HP04
KH2P04
8.000 г 0,375 »
I 0,275 » 0,210 » 0,150 » 0,025 »
2.000 » 0,250 »
(на 1 л дважды дистиллированной t воды)
. Состав растворов Симмса, г.'л
Компоненты растворов Х7 Х6 г Z16
NaCl............... 8 ь 8 6,8
КС1 .............. 0,2 0.2 0,2 0.17
0,147 0,147 0.147
MgCl2-6H20............ 0,203 0,203 0,20;? 0,172
NaH2PO,............. --- --- 0,021 ---
Na2HP04 ............ 0,213 0,213 0,19 1,28
1 1 1 0,85
Феноловым красный ....... 0,01 0.05 --- 0,075
NaHCO,............. 1,01 1,"1 (',1 ---
NaOH............ --- --- --- 0,77
Аспарагиновая кислота ...... --- --- --- 3,0
Сульфаметазин ......... --- --- --- 0,75
Реакции растворов доводят двууглекислой содой до pH 7,2—7,4. Растворы стерилизуют фильтрацией.
