Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Анджапаридзе О.Г. -> "Культура ткани в вирусологических исследованиях" -> 9

Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.

Анджапаридзе О.Г. Культура ткани в вирусологических исследованиях — Москва, 1962. — 207 c.
Скачать (прямая ссылка): kulturarkani1962.djvu
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 101 >> Следующая

Трипсин Дифко . ... 0,25 г
NaCl .............. . . 8,00 »
КС1 ......................0,20 »
MgClj • 6НаО .........0,10 »
NajHPOj • 2НгО ...........1,42»
КНгР04 -................... 0,20 »
(на 1 л воды, бидистиллироваиной в стеклянном аппарате)
Способ изготовления раствора трипсина следующий. Трипсин предварительно растворяют в 500 мл свежеприготовленной биди-стиллированной воды и хорошо перемешивают. Отдельно в 500 мл охлажденной до 5—6° бидистиллироваиной воды растворяют соли, затем оба раствора соединяют и прибавляют антибиотики.
В растворе трипсина pH доводят до 7,5—7,6; полученный раствор фильтруют через ватно-марлевую прокладку, а затем стерилизуют через фильтр Зейтца. Для этого последовательно используют асбестовые пластины 3/400 и EKS-2. Готовый раствор проверяют на активность и стерильность.
Хранят раствор трипсина в замороженном состоянии в течение нескольких месяцев, а при температуре 4—6° в течение 8—
10 дней, так как его активность довольно быстро понижается. Для
пересева клеток можно использовать раствор трипсина, сохраняемый при 4—6° до 2 месяцев.
Раствор версена (натриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Раствор версена применяют для снятия слоя выросших клеток со стекла как при работе с перевиваемыми штаммами, так и для получения из первичных культур клеток второй генерации. Особенно большое применение этот раствор получил при поста-новке цветной реакции. Он оказывает на клетки более мягкое действие, чем раствор трипсина. Механизм действия версена заключается в том, что при добавлении его раствора к пласту клеток он вступает в реакцию со стеклом, образуя промежуточное соединение, которое механическим путем отделяет клетки от стекла и разделяет их очень мягко друг от друга. Поэтому при обработке клеток раствором версена почти не образуется конгломератов клеток, что очень важно для получения равномерной взвеси. Обычно используют 0,02% раствор версена.
Версен .........................0,20 г
NaCl ...........................8,00 »
КС1 ............................0,20 *
Ма?НР04 • 2НгО .................1,15»
КН2РО4 .........................0,20 »
Бидистиллированную воду добавляют до 1 л. Стерилизуют аы-токлавированием 30 минут при 1 атм.
Хранят раствор при 4—6° в течение 1—2 месяцев.
Антибиотики. Открытие антибиотиков с широким спектром действия имело решающее значение для широкого применения метода культур тканей. Введение нескольких антибиотиков (натриевой соли пенициллина, хлоркальциевого комплекса стрептомицина, микостатина, нистатина и др.) в состав питательных сред позволяет избежать микробных проростов, которые являлись в прошлом одним из существенных препятствий для широкого использования культуры ткани.
Ниже приводятся обычно применяемые приемы приготовления растворов антибиотиков.
1. Концентрированный раствор микостатина или нистатина. Микостатин или нистатин растворяют в 80° этиловом спирте с таким расчетом, чтобы в 1 мл приготовляемого раствора содержалось 40000 ЕД препарата. Полученный раствор стерилизуют через фильтр Зейтца.
Раствор хранят в холодильнике при 4—6° не более 24 часов.
2. Концентрированный раствор пенициллина и стрептомицина готовят на бидистиллированной воде из расчета получить концентрацию в 500 000 ЕД каждого антибиотика в 1 мл раствора. Концентрат стерилизуют через фильтр Зейтца и проверяют на стерильность с предварительной инактивацией антибиотиков.
Хранят концентраты этих антибиотиков в замороженном виде.
Обычно в питательные среды и растворы для профилактических
целей добавляют такое количество антибиотиков, чтобы в 1 мл готового препарата содержалось пенициллина 100 ЕД, стрептомицина 100 мг, микостатина или нистатина 25—30 ЕД.
ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ ИЗ ЕСТЕСТВЕННЫХ КОМПОНЕНТОВ
Питательные среды из естественных компонентов применяют в настоящее время редко. Они вытеснены синтетическими средами. Однако следует отметить, что в первую фазу культивирования — выращивание клеток — к синтетическим средам, как правило, добавляют некоторые естественные компоненты и в первую очередь сыворотки.
Питательные среды из естественных компонентов готовят на основе какого-либо сбалансированного солевого раствора. Чаще всего для этих целей используют растворы Хэнкса или Эрла.
В качестве источников белкового питания, витаминов, факторов роста и других веществ, необходимых для роста клеток, в состав этих сред включают сыворотки животных, амниотические жидкости, эмбриональные экстракты. Обычно применяют сыворотки человека или некоторых животных {лошадей, крупного рогатого скота). Из амниотических жидкостей чаще всего используют коровью амниотическую жидкость. Эмбриональные экстракты готовят обычно из куриных или коровьих эмбрионов.
Остановимся несколько подробнее на основных из указанных компонентов.
Предыдущая << 1 .. 3 4 5 6 7 8 < 9 > 10 11 12 13 14 15 .. 101 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed