Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Сыворотки. Для включения в питательные среды используют сыворотки различных животных. Довольно широко используются н сыворотки человека. Выбор сыворотки зависит от вида культивируемой ткани.
Для культивирования клеток штамма HeLa Шерером, Сивер-тоном, Геем (Sherer, Syverton. Gey, 1953) и Мур, Собачевским и Тулан (Moore, Sabachewsky, Toolan, 1955) для клеток Нер-1, Нер-2, Нер-3 была использована сыворотка человека.
Лошадиная и телячья сыворотки были применены для замены дорогостоящей сыворотки человека при культивировании или поддержании клеток человека. Эрл, Брайант и др. (Earle, Bryant et al., 1956) адаптировали клетки HeLa к среде, содержащей лошадиную сыворотку, путем постепенной замены обычно применяемой сыворотки человека.
Многие клетки были впоследствии адаптированы к среде, содержащей гетерологические сыворотки.
Для 'Культивирования штамма клеток СОЦ Солком и Уорд (Salk, Ward, 1957) предложена сыворотка молодых телят.
Наиболее широкое применение нашла сыворотка молодых телят для культивирования как перевиваемых клеток Нер-1, Нер-2, Нер-3, СОЦ, HeLa, КВ, так и для выращивания первичных культур клеток, получаемых путем трипсинизации различных тканей.
По мнению большинства исследователей и по материалам, накопившимся у нас, введение сывороток в среды, используемые для первой фазы культивирования — выращивания клеток, является обязательным. Сыворотки не должны содержать консервантов и продуктов, токсичных для культивируемых клеток.
Прибавление сывороток не обязательно для сред, поддерживающих рост, т. е. во второй фазе культивирования, когда выросшие «летки используются для культивирования вирусов. В тех случаях, когда в среды, поддерживающие рост, добавление сывороток необходимо, сыворотки должны быть проверены на отсутствие ингибиторов или антител к вирусу, с которым должно проводиться исследование.
Гетерогенные сыворотки нельзя вводить в среды, используемые при накоплении вирусов в культуре ткани для производства различных вакцин.
Сыворотки 'получают из крови здоровых, молодых животных. Кровь берут натощак в стерильные широкогорлые пробирки, цилиндры или бутыли, сполоснутые стерильным физиологическим раствором (для лучшей ретракции сгустка и предохранения от гемолиза), и ставят на 20—30 минут в термостат. Затем сгусток отделяют от стенок сосуда стерильной пипеткой или стеклян-ной палочкой и кровь оставляют в холодильнике на 1—2 дня. Отстоявшуюся сыворотку отсасывают, фильтруют через фильтры Зейтца (асбестовые прокладки S-l, ST-I), прогревают при 56° 30 минут и берут пробу для контроля стерильности. Прогревание сыворотки не обязательно.
Сыворотку хранят в стеклянных сосудах с резиновой пробкой при 4° в течение полугода. При длительном хранении в сыворотке может выпасть осадок и она становится непригодной. Кроме того, сыворотку рекомендуется хранить в замороженном состоянии.
Асцитическая жидкость. Получают от больных (При удалении асцитической жидкости из брюшной полости. Асцитическая жидкость должна быть свободна от элементов крови и желчи.
Асцитическая жидкость рекомендуется в качестве заменителя сыворотки. Она имеет pH 6,9—7,0; перед применением pH ее требуется довести до 7,2—7,4 добавлением стерильного раствора соды, приготовленного на растворе Эрла. В качестве индикатора используют феноловый красный в обычной концентрации.
Асцитическая жидкость не нашла широкого применения ввиду неудобств ее получения.
Коровья амниотическая жидкость. На бойнях во время забоя крупного рогатого скота у коров с беременностью не менее 3 месяцев извлекают матку. Матку, помещенную в стерильную посуду (эмалированное ведро или кастрюля с крышкой), доставляют в лабораторию, где в боксе с соблюдением 'правил асептики извлекают амниотическую жидкость. Для этого поверхность матки обрабатывают йодной настойкой и спиртом. Стерильным скальпелем разрезают стенку матки, затем осторожно вскрывают амнио-
тическую оболочку. Зажимами Пеана или Кохера захватывают разрезанные края матки и амниотической оболочки, края слегка приподнимают так, чтобы жидкость не вытекала. Для отсоса амниотической жидкости используют бутылки с одним сифоном. Жидкость отсасывают с помощью вакуума.
После сбора амниотическую жидкость проверяют на стерильность и определяют pH.
Концентрация водородных ионов амниотической жидкости обычно колеблется от 6,5 до 8, поэтому рекомендуется готовить смесь амниотических жидкостей нескольких маток. Смешивание лучше ‘проводить после проверки стерильности. Амниотическая жидкость имеет соломенно-желтый оттенок. Более интенсивная окраска не является противопоказанием для ее применения.
Амниотическая жидкость должна быть прозрачной; она не должна содержать форменных элементов крови (последние попадают в нее при неосторожном вскрытии тюлости матки).
Хранят амниотическую жидкость во флаконах с резиновой пробкой при 4—6°, не более одного месяца. Периодически следует контролировать pH, который не должен превышать 8,0.
В амниотическую жидкость в (качестве индикатора для контроля pH рекомендуют прибавлять раствор фенолового красного
