Культура ткани в вирусологических исследованиях - Анджапаридзе О.Г.
Скачать (прямая ссылка):
Шении, что в испытуемой сконцентрированной воде содержится 2рг/мл цинка и меди, приведен в табл. 2.
Т а блиц а 2
Стандартная шкала для определения свинца в присутствии меди и цинка
Реактив Номер пробирки
1 2 з 4 5 6 7
Стандартны» раствор свинца
(10 и.г/мл), мл....... 0,05 0,075 0.1 0,15 0,2 0,3 0,5
Стандартный раствор меди
(10 [ДГ/МЛ), мл ...... 0,2 0,2 0,2 0.2 0.2 0,2 0,2
Стандартный раствор цинка
(2 цг/мл), мл....... 1 1 1 1 1 1 1
Содержанке свинца, ;j.r . . . 0,5 0.75 1,0 1,5 2,0 3,0 5,0
К исследуемому раствору добавляют 4 мл боратнобуферного раствора (pH 9,2). Во все пробирки с пробами и стандартной шкалой добавляют 0,35 мл 0,005% раствора плюмбона, после чего пробирки встряхивают и оставляют на 5 минут для развития окраски. Предварительно объем всех пробирок доводят боратно-буферным раствором до 8 мл и окраску колориметрируют по стандартной шкале или в электрофотоколориметре.
Расчет производится по формуле:
у-_й*1000 ~ "ft.100'
где X — содержание свинца :в мг/л; с —количество свинца, соответствующее по окраске шкале стандартного раствора; е — объем исследуемой жидкости; 100 — коэффициент концентрирования исследуемой воды; 1000 — пересчет иа 1 л.
— Определение цинка. В основу взят микрометод (М. В. Алексеева, 1957), разработанный для определения окиси цинка в атмосферном воздухе и приспособленный Г. А. Смирновой для определения этого металла в воде. Метод основан на реакции цинка с дитизоном, образующим в щелочной среде окрашенное в малиновый цвет соединение. Интенсивность окраски сравнивается со стандартной шкалой. Чувствительность метода 0,1 рг/мл.
Что касается определения железа и алюминия, то оно проводится по общепринятой методике, разработанной для анализов минеральных вод (В. И. Бахман, С. С. Крапивина, 1957). Для количественного определения железа применяется колориметрический метод, основанный на реакции железа с роданистым аммонием, образующим окрашенное в красный цвет роданистое железо. При определении алюминия использовался колориметрический метод, основанный на реакции алюминия с оксихинолином.
Последний образует оксйхИноЛят алюмйнйя, в водном растворе дающий желто-зеленое окрашивание.
Для анализов на цинк, железо и алюминий бидистиллирован-ную воду также концентрируют в 100 раз.
С помощью указанных методов Г. А. Смирнова в Московском научно-исследовательском институте вирусных препаратов исследовала волу, применяемую для производства питательных сред и растворов, используемых при культивировании ткани. Помимо воды, дважды перегнанной в стеклянных аппаратах и применяемой при изготовлении питательных сред для культуры ткани и вируса, исследовали также различные образцы воды, перегнанной в металлических аппаратах (табл. 3).
Таблица 3
Содержание металлов в различных образцах перегнанной воды
Металлы Вода» перегнанная Вода, перегнанная Вода, перегнанная Вода,
в металлическом в чешских в стеклянных аппа подучаемая
аппарате Криста аппаратах БДВ-20 ратах в канад
первая вторая первая вторая первая вторая
перегонка перегонка перегонка перегонка перегонка перегонка
Алюминий . 6,8 4 16 2,5 2,8 2 1,0
Железо . . 2 0,6 0,88 0,8 0,8 0,2 0,9
Цинк . . 6 5 44 6,6 0,4 0,2 0,5
Медь . . . 40 12 8 0,4 2,6 0,6 1,4
Свинец . . 4,5 2,5 1,25 1,25 1,5 1,0 0,9
Как видно из табл. 3, вода, как однократно перегнанная, так в особенности дважды перегнанная в стеклянных аппаратах, отличается наименьшим содержанием металлов и в этом отношении приближается к воде, применяемой в практике культивирования ткани канадскими авторами.
Биологическое испытание сред, изготовленных на этой воде, как для культивирования ткани, так и для накопления вируса не дало заметной разницы между образцами однократно и дважды перегнанной воды. В обоих случаях развитие клеток почечного эпителия обезьян и накопление вируса полиомиелита было нормальным и соответствовало принятым стандартам.
Вода, перегнанная в металлических аппаратах Криста, содержала значительное количество меди, в особенности после первой перегонки. Такую воду нельзя употреблять для споласкивания посуды, применяемой для культивирования ткани.
Была использована также вода, полученная в чешских аппаратах из нержавеющей стали типа БДВ-20. В воде, получаемой после первой перегонки в этих аппаратах, меди и свинца содержится меньше, чем в воде из аппарата Криста, но зато повышено содержание цинка и алюминия. Вода, получаемая после второй перегонки в тех же аппаратах, значительно лучше и по составу приближается к воде, перегнанной в стеклянных аппаратах, отличаясь от последней лишь большим содержанием цинка.
