Жидкостная хроматография при высоких давлениях - Энгельгардт Х.
Скачать (прямая ссылка):
2. Выбор элюента
Элюент для неизвестной смеси пока еще выбирают методом проб и ошибок, хотя в последнее время сделаны попытки предсказывать качество элюентов, используя параметр растворимости Гильдебранда [1, 20, 21]. Если речь идет о совершенно неизвестной смеси, с которой никаких предварительных опытов не проводили и разделить которую методом тонкослойной хроматографии не пытались, то лучше всего начать с элюента со средней полярностью, например с хлористого метилена. Если полученная величина к1 окажется слишком маленькой или составные части пробы будут выходить из колонки вместе с пиком инертного вещества, то это означает, что полярность элюента слишком велика. В этом случае переходят к тем алюентам, которые в элюотропном ряду стоят выше, т. е. элюентам с меньшей полярностью. Можно также снизить содержание вода в элюенте и тем самым увеличить активность адсорбента. Значение к' при этом также увеличится. Однако таким приемом следует пользоваться достаточно осторожно, поскольку при этом обычно усили-
Адсорбционная хроматография
121
вается нелинейность, следствием чего может быть образование хвостов.
Если вещества удерживаются сильнее, чем это желательно, то следует несколько увеличить элюирующую силу элюента, т. е. повысить его полярность. В этом случае используют элюенты, которые в элюотропном ряду стоят ниже использованного элюента. Если время удерживания слишком велико, его можно также уменьшить, увеличивая содержание воды в элюенте (уменьшая активность адсорбента). Такой способ подбора элюента очень трудоемок. Очень часто для того, чтобы разделительная система после смены растворителя пришла в состояние равновесия, требуется довольно много времени, до 15—100 мин, поэтому, если отсутствуют какие-либо указания о составе или хроматографическом поведении пробы, следует провести предварительное разделение пробы методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) (см. гл. X).
Элюирующая сила элюентов должна быть такой, чтобы значения к' были меньше 10. Только при этом условии разделение можно провести достаточно быстро. Однако получить такое значение к! на чистых элюентах удается очень редко и, как правило, приходится использовать смеси нескольких полярных растворителей.
3. Смеси растворителей
Полностью исчерпать возможности адсорбционной хроматографии можно, только используя в качестве элюентов смеси растворителей. Однако необходимо помнить, что мгогие физические свойства растворов, такие, как вязкость, растворимость и элюирующая способность, не меняются линейно с составом. Снайдер [1] установил для некоторых смесей зависимость экспериментально найденной элюирующей силы от состава (рис. VI.8). Показанные на рисунке кривые имеют характерную форму. Для того чтобы значительно увеличить элюирующую способность, достаточно уже незначительных количеств полярных компонентов. Это особенно наглядно видно на примере смесей компонентов, элюирующая способность которых сильно различается (например, пентан - пиридин или пентан — ацетон). Элюирующая способность смеси возрастает уже при добавлении нескольких процентов полярного компонента; дальнейшее увеличение концентрации незначительно повышает элюирующую силу. Если различие элюирующей способности элюентов незначительно, то зависимость элюирующей силы от состава примерно линейна (пентан - четыреххлористый углерод и пентан — н-хлористый пропил).
На рис. VI.9 показано влияние состава элюента на удерживание стероидов и барбитуратов. Если анализируются стероиды, чтобы значительно уменьшить к', достаточно добавить 1% уксусной кислоты к хлористому метилену. При разделении барбитуратов может
122
Глава VI
Концентрация В в А, об! %
Рис. -VI.8. Элюирующая сила смесей элюентов на окиси алюминия [1].
1 — пентан — четыреххлористый углерод; 2 — пентан — н-хлористый пропил; 3 - пентан — хлористый метилен; 4 — пентан — ацетон; 5 — пентан — пиридин.
наблюдаться аналогичная картина или же могут превалировать другие эффекты, например плохая растворимость в хлористом метилене, хорошая растворимость в уксусной кислоте и т. д. Объяснить подобные «вторичные эффекты» растворителя [1] очень трудно. Даже для элюентов с одинаковой элюирующей силой может наблюдаться изменение относительных удерживаний и обращение элюотропного ряда за счет «вторичных эффектов» растворителей [1].
Одной из причин «вторичных эффектов» может быть расслоение элюентов на поверхности адсорбента. Полярные компоненты всегда адсорбируются на адсорбенте в первую очередь. В тонкослойной хроматографии это ведет к образованию нескольких фронтов [22] с различным составом элюента. В разделительной колонке соответствующий эффект наблюдается только при первоначальном смачивании. Однако поскольку в колонку постоянно подается новый элюент,
Адсорбционная хроматография
123
Концентрация зтилацетата в хлористом метилене, ой! %
Рис. VI.9. Влияние состава элюента на удерживание.
«Щетки»: динитрофенил на меркогеле Si 100; элюент: хлористый метилен - этилацетат; колонка:
30 см.
Проба: 1 — прогестерон; 2 — тестостерон; 3 — проминал; 4 — люминал; 5 — барбитал.
