Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Для обеспечения движения жидкости через фильтр к ней необходимо приложить определенное давление извне. Подобное давление может быть создано центробежными силами, вакуумом на выходе установки, но чаще для этой цели используется подача нейтрального газа (например, азота) под определенным давлением в сосуд со средой, подлежащей очистке. Величина избыточного давления зависит от размера пор и диаметра (площади) мембраны. Подробные указания на этот счет приводятся изготовителем мембран.
Стерилизуемый держатель фильтра обычно изготавливается из качественной нержавеющей стали (например, 12Х18Н9Т) и состоит из двух частей тарельчатой формы, внутри которых имеется цилиндрическая выборка для размещения мембраны. Держатель горизонтально устанавливается на опорах, размещенных в его нижней части. Оба тарельчатых элемента имеют штуцерные вводы, обеспечивающие соединение с трубопроводами подачи и сбора фильтруемой жидкости. Соединение верхнего и нижнего тарельчатого элементов производится при помощи шпилек (обычно трех), на которые при сборке навинчиваются гайки, позволяющие ручную стяжку. Мембрана фильтра, размещенная на опорной сетке, под которой укладывается осушительная сетка, фиксируется в цилиндрической выборке держателя кольцевыми прокладками.
После установки мембраны и сборки держателя перед началом и после окончания фильтрации производится обязательная проверка правильности установки и сборки, а также качества мембраны. Для проверки используется «тест появления пузырьков» или «пузырьковый тест». Так как мембрана представляет собой тело, имеющее сеть единообразных переходов, могущих рассматриваться как однородные капилляры, то естественно, что для вытеснения из них жидкости необходимо приложить некоторое избыточное давление, обратно пропорциональное диаметру капилляров (пор). Тест заключается в создании на входе фильтра избыточного давления, при котором на выходе появляются пузырьки воздуха. Величина давления фиксируется и сравнивается с указанным в паспорте мембранного фильтра. Значение давления меньше паспортного показывает на неисправность в системе фильтрации.
При подборе и расчете фильтрующей системы рекомендуется предварительно сформулировать задачу (вид среды, подлежащей фильтрации, ее температура, вязкость, химический состав, размер частиц, подлежащих фильтрации, режим фильтрации — непрерывный или порционный и т. п.) и подобрать соответствующую мембрану, держатель, а также определить величину избыточного давления, необходимого для фильтрации.
Стерилизацию питательных сред рекомендуется проводить в боксовых помещениях или в так называемых ламинар-боксах, описываемых ниже.
Стерильные рабочие места. Обеспечение стерильности при работе с клеточными культурами обычно достигается путем помещения объекта исследования вместе с экспериментатором в так называемое боксовое помещение в виде изолированной комнаты, имеющей прихожую (предбоксник) и обеспеченную необходимым общим и специальным освещением, системами приточной и вытяжной вентиляции, горячим и холодным водоснабжением, а также подводами газов и сжатого воздуха. Стены, пол и потолок подобных помещений покрыты несорбирующими пыль и моющимися покрытиями.
Создание боксовых помещений, как правило, требует значительных капитальных затрат и не обеспечивает необходимой организационно-технологической гибкости при переходе к отличным от первоначальных методам исследований. Помещения не дают должной стерильности. Кроме того, неизбежны прямые контакты между объектом работы и оператором, что часто нежелательно.
Альтернативой является использование так называемых ламинар-боксов или стерильных рабочих мест. В этом случае в любом помещении может быть создан локальный стерильный объем, необходимый для работы и создающий биологическую защиту пользователей. Технически задача решается путем постоянного обдува места проведения работ (например, стола) ламинарным потоком воздуха, содержащего не более четырех частиц загрязнений с размером 0.3—0.5 мкм в 1 дм3. Избыточное давление воздуха в рабочем объеме и специальные конструктивные меры исключают возможность попадания воздуха из помещения на место, где расположен биологический материал. При работе с заведомо непатогенными материалами поток обеспыленного воздуха из рабочей зоны выходит непосредственно в окружающее пространство. В случае работы с потенциально патогенным материалом воздух перед выходом из рабочей зоны дополнительно фильтруется. Возможность обдува оператора при этом исключена. В зависимости от устройства ламинар-бокса поток обеспыленного воздуха в рабочей зоне может быть горизонтальным, вертикальным или наклонным. Использование ламинар-боксов обеспечивает оперативное переоборудование рабочих помещений при реализации новых методик и не требует дорогих и длительных монтажно-строительных работ. Ниже приводится описание отечественных приборов этого класса.
Ламинар-бокс с горизонтальным потоком обеспыленного воздуха типа УО-БГ (установка обеспыливания биологическая с горизонтальным потоком) имеет следующие параметры: габариты 1280X1120Х Х2000 мм; размеры рабочей зоны 1140X670X700 мм, масса 250 кг. Электропитание 220/380 В, 50 Гц, потребляемая мощность 1.1 кВА. Установка обеспечивает очистку воздуха, подаваемого в рабочую зону, до уровня не более четырех частиц размером больше 0.5 мкм в 1 дм3. Очистка производится путем фильтрации на фильтрах грубой и тонкой очистки, встроенных Bfnfflttarrfle мцрн.их загряз-
