Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Книга состоит из четырех разделов. Первый посвящен вопросам общей технологии клеточных культур, второй — методам анализа культивируемых клеток, третий — методам клеточной и генной инженерии и, наконец, четвертый — культивированию клеток разного происхождения. Все статьи написаны специалистами, имеющими большой практический опыт в соответствующих направлениях работы с‘ клеточными культурами. Достоинством данного сборника является то, что в нем учтен опыт работы в реальных условиях с применением отечественного оборудования, материалов и питательных сред.
К сожалению, объем книги не позволил включить в нее ряд важных методических приемов работы с клеточными культурами, которые, как мы надеемся, будут отражены в последующих изданиях. К ним относятся методы суспензионного культивирования клеток в ферментерах, культивирование на микроносителях, инкапсуляция культивируемых клеток для решения биотехнологических и медицинских задач, вопросы управляемого культивирования и ряд других.
Мы надеемся, что материал данной книги будет полезен широкому кругу читателей, в той или иной степени связанных с работой на клеточных культурах или собирающихся приступить к ней. Без сомнения, она найдет спрос у цитологов, генетиков, биохимиков, молекулярных биологов, физиологов, вирусологов и биотехнологов, а также у студентов старших курсов университетов и медицинских институтов.
Вместе с тем мы хотим обратить внимание читателей на то обстоятельство, что культивирование клеток представляет собой сложный технологический процесс, состоящий из ряда последовательных этапов. К ним относятся криоконсервация и хранение клеток, мытье и стерилизация посуды, приготовление и стерилизация пи-
тательных сред, работа в боксе в стерильных условиях, постоянный микробиологический контроль и периодический контроль видовой специфичности используемых клеток, предохраняющий от часто случающейся перекрестной контаминации клеточными линиями разного происхождения.
Многолетний опыт работы Отдела клеточных культур Института цитологии АН СССР свидетельствует о том, что пренебрежение ка-кими-либо из перечисленных этапов или несоблюдение мер предосторожности сводит на нет всю остальную работу. Следует подчеркнуть, что необходимо обеспечить квалифицированное мытье посуды, ее стерилизацию, приготовление сред и контроль за культурами.
Хотя в настоящее время в Советском Союзе существует Всесоюзная коллекция клеточных культур, из которой можно получить любую из имеющихся в ней клеточных линий, целесообразно и разумно организовать в каждом институте свою небольшую коллекцию рабочих штаммов. Это позволит избежать изменения характеристик клеточных линий в процессе их длительного культивирования.
При организации лаборатории или группы клеточных культур необходимо предусмотреть расположение помещений и отдельных подразделений таким образом, чтобы потоки грязного и чистого материала не пересекались и чтобы вся используемая посуда и все инструменты обрабатывались единообразно. В противном случае неизбежны нежелательные осложнения с чистотой клеточных культур. Желательно контаминированные культуры уничтожать немедленно и без сожаления, если существует источник для их восстановления.
Многие из перечисленных здесь вопррсов нашли отражение в отдельных разделах настоящей книги. Остается лишь пожелать читателям успехов в трудном и трудоемком деле работы на клеточных культурах.
В заключение мне хочется выразить глубокую благодарность И. И. Фридлянской за большую помощь при редактировании и компановке данной книги и Е. И. Гончаровой за помощь при подготовке рукописи к печати.
Г. П. Пинаев
Часть 1
Общая технология культивирования клеток
Оборудование, используемое при работе
с клеточными культурами
Н. С. Волосов
Институт цитологии АН СССР, Ленинград
Развитие работ с клеточными культурами предполагает создание соответствующей технической инфраструктуры, обеспечивающей должный уровень и единую методологическую базу проводимых исследований.
Технические средства, предназначенные для этой цели, должны / образовывать определенную систему, т. е. быть совмещенными по виду производимых операций и их последовательности, производительности, габаритам и эргономическим свойствам, обеспечивать возможно полное оснащение процедур, необходимых при работах с клеточными культурами. Полезным при подборе оборудования является составление так называемых номенклатурных перечней. При это'м все технические средства группируются по их месту в процессе работ с клеточными культурами, например: 1) приборы и устройства, обеспечивающие работу с клеточными культурами;
2) приборы и устройства для культивирования клеток; 3) микроскопы; 4) устройства для криоконсервации и хранения клеточных культур.
Предложенная классификация, естественно, не может охватить все возможные способы применения приборов и виды работ, но она дает систему для корректного подбора технических средств, нужных при создании и оснащении лабораторий и участков, связанных в своей деятельности с использованием клеточных культур.
