Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Следует подчеркнуть, что инвертированные микроскопы дают в основном качественную информацию об объекте наблюдения. Для получения количественной информации (цитохимической и морфометрической) используются другие приборы — проточные цитофлюо-рометры (описываются ниже), автоматические анализаторы денсито-метрических и планиметрических параметров микрообъектов и их изображений, автоматические счетчики-анализаторы клеток в суспензии. В большинстве вариантов перечисленных приборов инвертированный микроскоп является их базовой частью — источником получения информации о микрообъектах.
Устройства для криоконсервации и хранения клеточных культур
Программные замораживатели. Основным методом длительного хранения клеточных культур без потери их жизнеспособности, как известно, является так называемая криоконсервация.. Препарат, помещенный в ампулу, заполненную жидкостью — криопротектором, подвергают охлаждению с заданной скоростью до температуры —180°С, хранят при той же температуре. Технически эта задача реализуется в приборах, называемых программными замораживате-лями, где препарат в ампуле помещается в объем, продуваемый струей паров жидкого азота. Количество паров определяет скорость охлаждения и в свою очередь зависит от температуры нагрева испарителя, помещенного в емкость с жидким азотом. Прибор имеет рабочую камеру и систему управления для задания (ручного) и автоматического поддержания определенной скорости охлаждения и-ее вариаций по определенной экспериментатором программе. Замороженные препараты переносятся из замораживателя в емкости с жидким азотом, где и хранятся. Расконсервация совершается путем нагрева препарата также с определенной скоростью в приборе-декон-
серваторе, представляющем собой водяную баню с системой поддержания и задания программы нагрева.
В СССР небольшими партиями выпускается устройство для охлаждения, программное, типа УОП со следующими параметрами: объем одновременно замораживаемого материала 0.4 л, диапазон рабочих температур от 20 до —180 °С, режим работы: 1) автоматическое двухэтапное программное охлаждение со скоростями на первом этапе от 0.1 до 1.0 °С в 1 мин (с дискретностью задания в 0.1 °С/мин) и от 1 до 10°С/мин (с дискретностью задания в 1 °С/мин), на втором этапе — со скоростями 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 20, 30, 40, 50 °С/мин; 2) автоматический программный отогрев со скоростями от 1 до 3 °С/мин; 3) стабилизация температуры биоматериала в диапазоне от 0 до —99 °С; 4) автоматическое управление процессом кристаллизации биоматериала в диапазоне от 0 до —99 °С; 5) автоматический переход охлаждения с первого на второй этап. Расход жидкого азота не более 4.5 кг на программу, потребляемая мощность не более 2.0 кВА, масса не более 120 кг.
Низкотемпературные холодильники. Сохранение биологически активных веществ обеспечивается их содержанием в специальных хранилищах при температурах, лежащих в диапазоне от 4 до —140 °С. Одной из разновидностей подобных устройств являются так называемые холодильники глубокого холода, к которым относятся производимые в СССР холодильники КЛГХ (компрессионный ларь глубокого холода). Как следует из названия, холодильник представляет собой ларь или сундук. Доступ в рабочий объем производится сверху, через подъемную крышку, снабженную теплоизоляцией и запором. Для создания низкой температуры используется холодильный агрегат воздушного охлаждения с приводом от сети трехфазного тока 220/380 В, 50 Гц. В комплект поставки холодильника входит специальная укладочная тара, позволяющая легкое и удобное обращение с хранимыми веществами и их идентификацию. Холодильники имеют блок управления, обеспечивающий задание и автоматическое поддержание в рабочем объеме температуры от —5 до —90 °С. Заданные температуры поддерживаются с точностью в ±1.5 °С при температурах от —50 до —90 °С и с точностью ±5 °С при температурах от —5 до —50 °С. Холодильники снабжены местной и дистанционной аварийной сигнализацией с независимым источником электропитания, которая срабатывает при изменении температуры в рабочем объеме на ±15 °С от заданной. Ларь установлен на поворотные роликовые опоры для легкого перемещения на месте установки. Шум при работе холодильников не превышает 80 дБ.
Выпускаются три модели КЛГХ: КЛГХ-200 М (объем рабочей камеры 200 дм3, габариты наружные 1360Х930ХП00 мм, масса 300 кг, установленная мощность не более 1.5 кВА); КЛГХ-300 М (объем рабочей камеры 300 дм3, габариты наружные 1680Х930Х X 1100 мм, масса 340 кг, установленная мощность не более 1.5 кВА); КЛГХ-500 (объем рабочей камеры 500 дм3, габариты наружные 2115Х930Х 1100 мм, масса 500 кг, установленная мощность не более
1.5 кВА). .
Аварийная система в холодильниках должна обеспечивать поддержание низкой температуры в случае выхода из строя холодильного агрегата прибора или аварий в сети электропитания по крайней мере до прибытия на место обслуживающего персонала. Выпускаемая в СССР система САПТ (система аварийного поддержания температуры) работает по принципу управляемой (дозированной) подачи в рабочий объем холодильников КЛГХ жидкой двуокиси углерода из баллонов, расположенных в установке САПТ. Имеются два таких баллона емкостью 40 дм3 каждый, что позволяет поддерживать низкую температуру длительное время (достаточное для устранения аварии холодильника). Прибор снабжен также блоком управления для задания и индикации температуры в холодильнике. Питание системы САПТ производится от встроенных аккумуляторов. Технические параметры САПТ: габариты 985X800X1560 мм, масса 150 кг с заполненными баллонами, диапазон поддержания температур от —5 до —50 °С с точностью в ±5 °С, длительность поддержания температуры 12 ч для КЛГХ-500 при температуре —50 °С. Включение прибора САПТ происходит автоматически, одновременно с подачей аварийного сигнала об уходе температуры в КЛГХ в сторону повышения. Баллоны для углекислоты в комплект поставки не входят.
