Практикум по гистологии, цитологии и эмбриологии - Юриной Н.А.
ISBN 5-209-00126-1
Скачать (прямая ссылка):
3. Электронный микроскоп, его устройство, основные характеристики.
4. Основные требования к гистологическому препарату, предназначенному для микроскопирования.
Задания:
1. Возьмите биологический рабочий микроскоп (МБР). Изучите его составные части. Наладьте освещение. Поставьте на предметный столик препарат, проследите за тем, чтобы покровное стекло было обращено вверх. На малом увеличении найдите интересующую вас структуру и рассмотрите ее при большом увеличении.
2. В микроскопе сравнения в одной половине поля зрения виден орган контрольного, в другом — подопытного животного; сравните особенности их структуры.
3. Возьмите чешуйку луковицы. Снимите с нее тонкую пленку, поместите в каплю физиологического раствора п изучите строение живой растительной клетки с помощью фазово-контрастного микроскопа.
4. Изучите с помощью люминесцентного микроскопа препарат, окрашенный акридином оранжевым. Обратите внимание на зеленое свечение ядер и красное цитоплазмы.
5. Ознакомьтесь с методикой получения ультратонких срезов на ультратоме и с основными приемами изучения гистологических объектов в электронном микроскопе.
Контрольные вопросы:
1. В чем состоят сходство и отличия светового и электронного микроскопов, каковы их разрешающие способности и увеличения?
2. Каковы преимущества фазово-контрастного микроскопа?
3. С какой целью применяется микроскоп сравнения?
4. Каковы отличительные особенности ультрафиолетовой микроскопии?
5. В чем состоит достоинство люминесцентной микроскопии?
Ситуационные задачи:
1. Вам необходимо рассмотреть форму неокрашенных живых клеток. Какие виды микроскопии можно применить?
2. Вы намерены изучить структуру клеточной оболочки, име-ющей толщину 7—10 нм. Каким микроскопом вы воспользуетесь?
3. Перед вами стоит задача изучить на уровне световой микроскопии мелкие детали строения клетки. Какой объектив вы используете: Х8, Х40 или иммерсионный?
4. Необходимо выявить возможно большее число гистологических структур. Какой из двух режимов микроскопирования (объектив Х40, окуляр ХЮ или объектив Х20, окуляр Х20) вы выберете?
5. Дано задание выяснить, имеются ли изменения в интенсивности гистохимического окрашивания изучаемой структуры в норме и после какого-либо воздействия. Какой вид микроскопирования лучше применить?
Подтема 3 СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ИССЛЕДОВАНИЯ МИКРОСТРУКТУР В ГИСТОЛОГИЧЕСКИХ И ЦИТОЛОГИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТАХ (ОБЪЕКТАХ)
Количественная оценка микроструктур является необходимым условием получения объективных данных об их состоянии в норме, при эксперимента ль-
иых воздействиях н в патологии. Основными количественными показателями микроструктур являются морфометриче с к и е (число структур и их геометрические параметры) и д е и с и т о м е т р и ч е с к и е, отражающие концентрацию (оптическую плотность) химических веществ в микроструктур рах. Для выявления этих параметров применяют морфометрические и спектрофотометрические методы, а также автоматизированные системы обработки изображений.
Морфометрия
Морфометрия включает совокупность приемов и методов определения геометрических характеристик исследуемых объектов. В качестве объектов могут быть использованы изображения гистологических препаратов (срезов, мазков, отпечатков и др.), а также микрофотографии, Измерение числа структур, их площадей, диаметров, периметров и других показ а теле ii производится с помощью специальных сеток (Е. Р. Венбеля, А. А. Глаголе' ва, С. Б. Стефанова), курвиметра, метода вычисления весовых соотношений путем взвешивания. Измерения микроструктур в световых микроскопах производят с помощью окуляр-микрометра или вышеуказанных сеток, вставляв* мых в окуляр микроскопа. Морфометрия электронно-микроскопических изображений является разновидностью морфометрии, где измерение геометрических характеристик производят также с помощью сеток непосредственно на экране электронного микроскопа либо на электронных микрофотографиях.
Рассмотрим некоторые примеры морфометрических исследовании гисто-логических структур.
1. Измерение микроструктур с помощью окуляр-микрометра. На предметный столик микроскопа устанавливают объект-микрометр. Под микроскопом определяют число делений объект-микрометра, соответствующих числу делений окулярной измерительной линейки (окуляр-микрометра). После чего, пользуясь шкалой окуляр-микрометра, производят измерение объектов.
2. Измерение микроструктур с помощью морфометрических сеток. Морфометрические сетки используются для планиметрических (измерение площадей структур) и стереометрических (определение доли объемов компонентов структур от общего объема) исследований. Например, можно использовать сетку, состоящую из линий постоянной длины, расположенных на равном расстоянии друг от друга таким образом, что получается сетка из равносторонних треугольников. При таком: расположении отрезков каждая концевая тестовая точка равнозначна абсолютной величине площади (а)
