Практикум по гистологии, цитологии и эмбриологии - Юриной Н.А.
ISBN 5-209-00126-1
Скачать (прямая ссылка):
уз~
— -Z2, где Z—>длина тестовой линии. Стереометрические исследова-
ния можно производить с помощью любой сетки, в которой тестовые точки
Pi
лежат на равном расстоянии друг от друга, по формуле Vvt = — XI00, где
Рг
Уvi— доля объема, который занимает изучаемый компонент структуры от общего объема; Рг — число тестовых точек, приходящихся на данный компонент; Pi — общее число тестовых точек, приходящихся на всю структуру. При таком исследовании стереометрические данные получаются в относительных цифрах — долях объема в процентах от общего объема.
Микроспектрофотометрия
С помощью этого метода можно определить химический состав, концентрацию и количество различных веществ, содержащихся в конкретных
18
структурах клеток и тканей. При микроепектрофотометрии измеряется количество лучистой энергии, прошедшей через определенный элемент структуры препарата, зависящее от содержания вещества (и его химического состава) в этом элементе. Спектрофотометрирование микрообъектов проводят на прй^ борах — микроспектрофотометрах, представляющих собой комбинацию микроскопа со спектрофотометром, снабженных фотоэлектрическим преемником света. Основными узлами установок для микроспектрофотометрирования являются: 1) источник излучения, 2) монохроматор (обеспечивает получение света необходимой длины волны), 3) микроскоп и приемник лучистой энергии (фотоэлектронный умножитель). Свет от источника (ксеноновая или ртутная лампа высокого давления) направляется через монохроматор, который выделяет излучение нужной длины волны для освещения препарата. Интенсивность излучения в заданной точке препарата регистрируется с помощью фотоэлектронного умножителя. Далее сигнал поступает в автоматический графопостроитель. Для исключения ошибок в измерении необходимо соблюдать стандартность условий: использовать стекла и препараты одинаковой толщины, одинаковую величину регистрирующего зонда и др.
В качестве примера рассмотрим определение содержания ДИК в лимфоцитах крови.
Лимфоциты в мазках крови, окрашенных по Фельгену, микроспектрофо-тометрируются с использованием излучения с длиной световой волны 570 им. В результате измеряется содержание ДНК в участке ядра лимфоцита, равном по площади размеру регистрирующего зонда. Содержание (т) ДНК во всем ядре лимфоцита определяют по формуле
s
т = с • ¦—, а
где с — содержание ДНК в участке, равном по площади размеру зонда; а площадь зонда; s—• площадь ядра лимфоцита.
Размер зонда выбирается, исходя из задачи исследователя и увеличения объектива микроскопа, площадь ядра клетки определяется при помощи окуляр-микрометра.
Автоматизированные системы обработки изображений (АСОИз)
Автоматизация определения количественных параметров (морфометрических и деиситометрических) изображений структур, получаемых в световых и электронных микроскопах, позволяет объективизировать их оценку, значительно снизить трудоемкость операций и повысить эффективность исследований.
В состав автоматизированных систем обработки изображений входят специальные сканирующие микроскопы, оснащенные фотометрическим или телевизионным прием ни ком изображения. Видеосигнал, несущий информацию об анализируемом изображении, подается со сканирующего микроскопа в электронную вычислительную машину (ЭВМ). ЭВМ производит математическую обработку изображения и выдает информацию о геометрических, фотометрических, текстурных характеристиках исследуемых объектов, При использовании достаточно мощных ЭВМ и специальных программ с помощью АСОИз можно автоматически распознавать и классифицировать исследуемые объекты и структуры, осуществлять их трехмерную реконструкцию, а при необходимости математически моделировать изображения структур при различных воздействиях или патологии.
Рассмотрим схему автоматизированного анализа изображений клетки крови. Он состоит из следующих этапов: 1) сканирование клетки для по-
лучения цифровой матрицы ее изображения, 2) ввод цифрового изображения IB ЭВМ, 3) обработка на ЭВМ цифрового изображения с целью нахождения количественных характеристик объекта, 4) выдача результатов на печать или дисплей.
Цель занятия — изучение принципов получения количественных характеристик микроструктур с помощью морфометрических и спектрофотометрических методов.
Задачи; 1. Овладение морфометрическими методами изучения структур гистологических препаратов.
2. Овладение морфометрическими методами изучения ультраструктур на электронных микрофотографиях.
3. Ознакомление с методами микроспектрофометрии и получения денситометрических характеристик —концентрации и содержания веществ в клетках.
4. Ознакомление с автоматизированными системами обработки изображений клеток и тканей.
Задания:
1. С помощью окулярной сетки (или окуляр-микрометра) произвести измерение диаметра и площади клетки, ее ядра и вычислить ядерно-плазматическое отношение.
