Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.
Скачать (прямая ссылка):
Рис. 20-21. Электронпап микрофотография кольцевой хромосомы аденовируса 2, выявляемой после разрушения инфекционных частии щадящим способом. (С любезного разрешения д-ра Дэниэл, Лаборатория в Колд Спрппг Харборе.^ Под действием протеолитичегкн.х ферментов кольцевая форма очтцепной ДНК аденовируса превращается в линевпую.
предстоит выяснить. Скорее всего они играют определенную р<мь при репликации ДНК, поскольку не существует аденовирусных мРНК, комплементарных к инвертированным последовательностям.
Высокоочищенные ДНК аденовирусов всегда имеют линейную форму; между тем ДНК из вирусные частиц, разрушенных щадящим способом, перпоначальпо представляет собой кольцевые молекулы (рис. 20-21). Поскольку после обработки кольцевых комплексов протеолитическнми ферментами образуются линейные молекулы, какие-то структурные белки вирусной частицы должны удерживать вместе ьонцы линешюн молекулы ДНК аденовируса. Кольцевые формы видны также в инфицированных клетках, из чего можно предположить, что кольцевая структура сама по себе может играть важную роль в репликации ДНК.
ТРАНСФОРМИРОВАННЫЕ КЛЕТКИ НИКОГДА НЕ СОДЕРЖАТ ПОЛНОГО ГЕНОМА АДЕНОВИРУСА
Заражение аденовирусами клеток, в которых они не способны размножаться (непермисснвных), иногда приводит к образованию трансформированных клеток, образующих опухоли. Процесс трансформации в данном случае, так же как и под влиянием вируса SV40, является результатом включения генов аденовируса в хромосомы хозяина. Как он происходит, пока не ясно, известно лишь, что трансформированные клетки всегда содержат неполный вирусный геном. В нем отсутствуют строго определенные блоки гопов — вероятно потому, что продолжение их функционирования в составе клеточной хромосомы немедленно привело бы к гибели клетки (к примеру, в результате полного выключения синтеза клеточных
Полный геном аденовируса
^асщепление
рестрик-глзамн
И зол I ровинниь ДНК
Г ибридизуе1 ся только фрагмент расположенный на леном конце генома
Г ибридшация
Ф рагмешы.обра ivcMi.ic пгм iciicinuc-J речрикт.м
i I I 1 1 I
Д«>бав ichiic специфических фрл м к непермиссивным клешам крыс
I
llll I
| Трансформации нет
Т| апсфирмированния кле! ка крысы
Рис. 20-22. Схема опытов, показавших, что только левый конец молекулы ДНК аденовируса участвует в клеточной трансформации. А. Присутствующая в трансформированных клетках аденовпрчс-спсцнфнческая ДНК обра-
зует гибриды только с фрагментами ДНК, расположенными на левом конце генетической карты. Б. Трансформировать неиерлшееншпл-кле'шн способен только фрагмент ДНIV. рагпп ложенHblii на левом конце молекулы.
ДНК и 1’НК). Многие трансформированные клетки содержат половши вирусного генома, однако есть и такие, в которых представлено всего 4% полного геиома. В этих слхчаях генетический материал аденовируса происходит исключительно из крайнего левого конца генетической карты и всегда содержит ранний геп, считанный с Z-цеии (рис. 2(J 12).
В трансформированных клетках обнаруживаются большие количества мРПК, транскрибированной с этого раннего гона (генов), одиако молекулярные свойства соответствующего ей белкового продукта (или продуктов) до енх пор еще недостаточно охарактеризованы. Его можно легко обнаружить имиунологически, поскольку все трансформированные аденовирусом клетки, так же как и клетки, подвергающиеся литической инфекции, «•одержат вирус-специфический Т-антиген - и в цитоплазме, и в ядре. Связывается ли он с ДНК, подобно Т-ангигену вируса SV40, неизвестно. Поскольку Т-антигеи аденовируса относительно стабилен, есть надежда получить его в ближайшее время в высокоочнщсниом виде — тогда можпо б\ дсг приступить к выяснению того, каким образом его функционирование может превращать нормальную клетку в злокачественную.
КЛЕТКИ. ТР \НСФОРМ11РОВАННЫЕ АДЕНОВИРУСОМ,
ЛЕГКО ОТЛИЧИМЫ ОТ КЛЕТОК, ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ ВМГМ'.ОМ SV40
Морфология клеток хомпчка, трансформированных аденовирусами, всегда отличается от морфологии тех же клеток, трансформированных вирусом SV40 (полиомы). Большинство клеток, трансформированных аденовирусом, сохраняет округлую форму в течение всего клеточного цикла и напоминает сферические клетки, находящиеся в середине митоза (рис. 20-23). В клетках, трансформированные аденовирусом, почти пе содержится волокон. подобных мышечным, и, вероятно, потому они не способны прикрепляться к твердым поверхностям и впоследствии принимать плоскую форму. В то же время клетки, трансформированные вирусом SV40, характеризуются мепее плоской формой, чем их нормальпые прототипы, и редко обнаруживают сходство с клетками, находящимися в митозе: в них иа протяжении всего клеточного цикла содержится значительное количество организованных волокон, напоминающих мышечные. Поэтому можно думать, что развитие ракового фенотипа идет по нескольким биохимическим путям и что функция Т-антигена аденовируса отличается от функции Г1 антигена вируса SV40 (полиомы).
