Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уотсон Дж. -> "Молекулярная биология гена" -> 277

Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.

Уотсон Дж. Молекулярная биология гена — М.: Мир, 1978. — 706 c.
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyagena1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 271 272 273 274 275 276 < 277 > 278 279 280 281 282 283 .. 317 >> Следующая

ПРИ ТРАНСФОРМАЦИИ ПРОИСХОДИТ ВКЛЮЧЕНИЕ ДНК ВИРУСА SV40 В ХРОМОСОМЫ КЛЕТКИ-ХОЗЯИНА
Метод гибридизации РНК с ДНК использовали сначала для выявления последовательностей ДНК вируга SV40 в ДНК. выделенной из трансформированных клеток. Когда исследовали ДНК из нормальных клеток, последовательности ДНК вируса SV40 обнаружить не удавалось. Интегрированная ДИК вируса SV40 локализуется в ядре; ь цитоплазматических оргапеллах (митохондриях) ее нет. D ядре она, по всей видимости, ковалентно связана с хромосомной ДНК, поскольку при использовании метода щадящей экстракции оказалось, что последовательности ДНК, гибрпднзующиесн с мРНК вируса SV40, являются частью очень длинных молекул ДНК (мол. вес > 10я).
Каждая трансформированная клетка содержит приблизительно от \ до 20 геномов вируса SV40; их число может отражать число частиц вируса SV40, вызвавших трансформацию соответствующей непермиссивнон клетки. Если клеткой из организма человека интегрируется только одна (или несколько?) молекула ДНК вируса SV40, то чаще всего она включается в хромосому 7. Фермент(ы), участвующий(ис) в процессе интеграции, неизвестен; проще всего объяснить происходящее кроссинговером, схема которого изображена па рис. 20-17. Поскольку при интеграции предпочтение отдается одной определенной хромосоме, можно предположить что в процессе кроссинговера принимают участие строго определенные нуклеотидные последовательности (это касается как хромосом вируса SV40, так и хромосом человека).
ВЫСВОБОЖДЕНИЕ ИНФЕКЦИОННЫХ ЧАСТИЦ ПОСЛЕ СЛИЯНИИ ТР\НС.ФОРМИРОВАШШХ НЕИЕГМИССЙВНЫХ КЛЕТОК С НЕТРАНСФОРМИРОВАННЫМИ ПЕРМИССИШГЫМИ
В течение многих лет предпринимались попытки индуцировать в клетках, трансформированных вирусом подиомы, формирование инфекционных вирусных частиц. Безуспешным было даже использование агентов, вызывающих исключение прсфага Я из хромосомы E.coli. Между тем в случае вируса SV40 метод слияния клеток оказался эффективным. Через 24 ч
Место включения
Промоторы
транскрипции
Поздние гены, колирую щи белки обсючки
Ранние 11*иы К О лир у ю L11 не Т-антиген
Кроссинговер с кле точной хромосомой
Специфическим локус в хромосоме 7 человекi
Рис. 20-17. Схематическое изображение включения ДНК вируса SV40 в определенную клеточную хромосому. Важно то, что место включения вирусной ДНК находится в области поздних генов, в результате чего синтез интактной поздней мРНК вируса SV40 становится невозможным. Однако в таких трансформированных клетках могут образовываться иитактные молекулы ранней мРНК.
Поздний Ранний промотор промотор
I
Транскрипция
I 1
1//МЛ
Неполная мРНК белка оболочки
Интеграция генома
Транскрипции nei HJ-Jd ОТО Г». 1 RHfa npOMOI OPd
Ранняя мРН К Т-аш иге на
после слияния клетки ЗТЗ, трансформированной вирусом SV40, с нетрапс-формированной клеткой, пермиссивиой для этого вируса, во многих слившихся клетках наблюдается формирование дочерних частиц вируса SV40 (рис. 20-18). Складывается впечатление, что некое вещество, содержащееся в пермиссивных клетках, обеспечивает вирусу возможность пройти полный цикл размножения. До сих пор эти результаты не удалось воспроизвести на клетках, трансформированных вирусом полнимы. Видимо, объясняется это какими-то тривиальными, а не фундаментальными причинами. Есть основания полагать, что, как и в случае вируса SV40, у вируса полномы в составе трансформированной клетки находится весь гспом целиком, а не какой-то его отдельный фрагмент.
СОДЕРЖАТ ЛИ ПЕРМИССПВНЫЕ КЛЕТКИ ФАКТОРЫ,
НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ ТРАНСЛЯЦИИ ПОЗДНЕП мРНК
Обнаружение частиц вируса SV40 в трансформированных ядрах непер-миссивпых клеток после слияния с, нермиссивпымн указывает на то, что в отличие от профага % геномы вируса SV40 находятся под позитивным, а не под негативным контролем. Геном профага Я иаходится в неактивном состоянии из-за присутствия репрессора, который специфически препятствует транскрипции как ранней, так и поздней мРНК. Но еслп бы отсут-
Трансформированная непермиссивная клетка (кролик)
Т-лшш ен
Клеточная хромосома
И нгегрированная Л Н К вируса SY40
1
II ермиссиьная клетка (обезьяна)
Рис. 20-18. Оснобождспис ипфекцпоппых частиц вируса SV40 из трансформированных ненермиссивных клеток кролика после слияния с пермнсспвпыми клетками обезьян. В небольшой доле ненермиссивных клрток геном вируса SV40 исключается нз хромосомы хозяипа и временно существует в виде свободной молекулы ДНК (эппсомы). После слияния с пермиссивнымн клетками вир>с SV40 обнаруживается только в этих к летка v.
A. Изредка наблюдается спонтавиое исключение ДНК вируса SY40 из клеточной хромосомы. Б. Поздняя мРНК да способна транслироваться с образованием белков оболочки.
B. Слияние клеток. Г. В результате трансляции поздней мРНК вируса SY40 с использованием факторов трансляции на пермиссивных клеток образуются структурные белки оболочки п в ядре происходит сборка зрелых частиц вируса SV40.
Предыдущая << 1 .. 271 272 273 274 275 276 < 277 > 278 279 280 281 282 283 .. 317 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed