Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.
Скачать (прямая ссылка):
ТРАНСКРИПЦИЯ ДНК ПРОВПР^СА
После интеграции ДНК в виде провируса транскрибируется РНК-поли-меразой II эукариотов — ферментом, ответственным за сиптез клеточной РНК. По сравнению с другими генетическими ДНК провируспая ДИК транскрибируется предпочтительно, причем около 1 % всей клеточной мРНК является ВСР-специфической. Таким образом, исследовать эти траискрипты относительно легко. Большинство ия них имеют константу седиментации 35S п представляют собой скорее всего полные траискрипты провируса ВСР. Другие транскрипты имеют константу седиментации 20Ь и являются, возможно, частичными транскриптами. Одпако до последнего времени еще никому не удалось показать, есть ли в 35S- п 20S-1*11IV общие нуклеотидные последовательности.
Сначала большая часть транскринтон связывается с рибосомами н направляет синтез ВСР-спсцифического белка. Все еще истастся пенс ним, каким образом сердцевинные белки ВСР освобождаются в цитоплазму, а два мембранных белка ВСР внедряются исключительно в мембрану эпдоплазматнческой сети. Наиболее простым объяснением явилось бы существование двух различных траискрпптов. Один из пих прикрепляется к рибосомам, связанным с мембраной, и играет роль матрицы для белков ВСР, обнаруживаемых во внешней оболочке. Второй трапскрип г, который должен связываться исключительно со свободными рибосомами, кодирует при этом все внутренние белки. Однако доказательств существования двух подобных транскришов нет. Предварительные эксперименты показывают, что ВСР-специфические трапскринты с константами седиментации M.">S и 2US прикреплены как к связанным с мембранами, так и к свободным рибосомам. Правда, след\ет обратить внимание на то, что в этих эксперимента \ могло прояниться действие примесей рибоиуклеаз; не исключено, что в последующем будут получены принципиально иные результаты.
СЕРДЦЕВИННЫЕ СТРУКТУРНЫЕ БЕЛКИ ОБРАЗУЮТСЯ [|:с ОБЩЕГО 110.1 11ПЕПТИДН0Г0 ПРЕДШЕСТВЕННИКА
Пить сердцевинных белков ВСР не синтезируются в виде отдельных белков, а сначала являются частью большого полинептидного предшес гнен-ника, который под действием протеаз быстро расщепляется на белки тех размерои, которые характерны для зрелой частицы вируса. Убедительных данных в пользу существования еще более крупного предшественника, расщепление которого приводило бы к образованию и поверхностные гликопротеидов, и сердцевинных белков, получить не удалось. Каждая мРНК ВСР может иметь по крайней мере два независимых участка инициации (связывания рибосом) и терминации: один для синтеза предшественника сердцевинных полипептидов и один или более для синтеза гликопротеидов оболочки. Если это так, то РНК ВСР в таком случае должна напоминать скорее бактериальную, чем эукариотическую мРПК Кез-уелпвио, для понимания молекулярных механизмов транскрипции и трансляции в опухолевых РНК-вирусах нужны дальнейшие исследования.
ПРЕВРАЩЕНИЕ 35S-PTIK В 70S-PHK ВНУТРН ПОЧКУЮЩИХСЯ ВИРУСНЫХ ЧАСТИЦ
После внедрения в клеточную мембрану вирусные гликопротеиды начинают агрегировать. Белки клеточной мембраны вытесняются из эгич агрегатов, что приводит к образованию обширных мембранные бляшек (patches), в которых все белковые компоненты являются вирус-специфи-
ческимп (рис. 20-28) Эти бляшки обладают высоким сродством к PIIK содержащим сердцевинам, формирующимся в прицеп е сборки, и быстро окружают их, заключая н внрус-специфпческую оболочку. Зрелые вирусные частицы образуются, таким образом, в результате отпочковывапия от клеточных мембран. Обычно большинство частиц отпочковывается от наружной плазматической мембраны, а часть почкуется но внутренние полости эндоплазматической сети Когда начинается почконаине, геномная РНК все еще существует в виде отдельных ЗГ)8-цепен. Однако по мере появления зрелых форм Збв-цепи соединяются вместо и образ}ют 7IJS комплекс.
ТРАНСФОРМАЦИЯ В ОТСУТСТВИЕ РАЗМНОЖЕНИЯ ВИРУСА
R течение нескольких лет изменения, вызываемые на клеточной п. верх-ностн отпочковыванием Дочерних вирусных частиц, рассматривались как возможный механизм образования рака под влиянием РПК-содержащих вирусов. По сейчас накоплено много примеров, покалывающих, чти 1*11 К-содержащие вирусы могут вызывать трансформацию н при атом не размножаются. Часто это происходит при заражении чужеродных клеток. Напри мер, частицы ВСР никогда не о точковываются пт трансформированных :пн.м вирусом клеток крысы, несмотря на интеграцию полного генома ВСР. Трансформация, не сопровождающаяся размножением паб подается также при заражении клеток кур при темпера ту ре 39 С некоторыми темпе-ратурочувствительными мутантами ВСР, неспособными ра.шпом.аться при .пой температуре. В данпом случае образуется очень незначительное количество структурных белков вируса или они вообще не образуются. Подобные результаты ставят под сомнение гипотезу о том, чти внедрение специ фического белка ВСР в клеточные мембраны является причиной вызываемого ВСР рака.
НЕКОТОРЫЕ Л1УТАНТЫ НОРМАЛЬНО РАЗМНОЖАЮТСЯ.
НО НЕ СПОСОБНЫ ТРАНСФОРМИРОВАТЬ КЛЕТЫ)
При размножении ВСР возникают мутанты, которые полностью утрачивают способность трансформировать клетки, но при этом размножаются нормально. Многпе из этих мутантов возникают и результате делецнн. Выяснилось, что при делециях всегда утрачивается определенный участок генома дикого типа. Этот трансформирующий участок, или онкоген (раковый ген) составляет около 1о?о генома дикого типа и. следовательно, обладает способностыо кодировать 450 аминокислот. II в этом случае картина опять-таки существенно отличается от того, что известно для ДНК-содержащих опухолевых вирусов, в которых вирусные гены, необходимые для трансформации, играют, по-видимому, незаменимую ро и. в размножении вируса. Изучение размножения РНК-сочержащих опухолевых вирусов само по себе вовсе не обязательно должно пролить свет на возник новение рака в их присутствии. Для того чтобы решить эту проблему, необходимо сконцентрировать внимание на том конкретном генетическом материале, который присутствует в трансформирующих вирусах и отсутствует в вирусах, неспособных трансформировать клетки.
