Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.
Скачать (прямая ссылка):
Рис. 20-19. Схематическое изображение частицы аденовируса, а также диаграмма линейной иплекулы его ДНК ц фрагментов, образующихся в результате расщепления под действием фермента П1 Е. culi (R 1-фрагментов). Показана также локализация нескольких видов ранней и поздней мРПК аденовируса,
а также белки, которые, по-впдпмим>, кодп-рутотся этими мРНК. Вверх \ справа локалана алектрофпррграмма (в полиакриламидном геле с добавлением до деци л сульфата naipim, ДСП) белков, которые еиптелируются на мГ’НК, транскрибированных с RI-фратентов ДНЬ' аденовируса.
диаметр ~ 800 А и мол. нее — 17Г>-106 Она состоит иа ДНК и белковой оболочки икосаздрической формы (20 граней), образован поп правильной агрегацией специфических белковых субъединиц нескольких пипов (рис. 20 19). Оболочка окружает двухцепочечную молекулу ДНК с мол. несом около 2Г1-10® в комплексе с сердцевинными белками двух типов. Всего внутри каждой вирусной частицы находится около девяти (десяти!1) различных белков, каждый из которых играет, вероятно, определенную жизненно важную роль.
Заражение восприимчивых клеток человека аденовирусами человека приводит к развитию логической инфекции, кульминация которой состоит в появлении приблизительно 103 новых вирусных частиц. Эти дочерние частицы накапливаются в ядре, функционирование которого в результате размножения вируса нарушается. Геном аденовируса подавляет активность синтезирующего аппарата клетки хозяина куда эффективнее, чем геном вируса SV40,— в последнем случае хромосомы клетки хозяина продолжают нормально функционировать До самых поздних стадии инфекционного процесса. При аденовирусной инфекции, напротив, синтез ДНК, так же как и синтез PIIK в клеткнх-хозяевах. быстро замедляется п уже через 15 ч большинство вновь синтезированных белков является вирус-специфическим.
ГЬНОМ АДЕНОВИРУСА КОДИРУЕТ ПРИБЛИЗИТЕЛЬНО 1!0 РАЗЛИЧНЫХ БЕЛКОВ
В клетках, зараженных аденовирусом, ужо идентифицировано приблизительно 20 различных вирус-специфических белков (а следовательно, и генов). Если некоторые из них относительно малы (мол. вес ~ 10 000), то другие характеризуются достаточно крупными размерами (мол. вес ~ 100 000); при суммировании молекулярных весов получается величина, почти точно соответствующая общей кодирующей способности молекулы ДНК аденовируса (мол. вес 25-Ю6). Следовательно, почти весь геном аденовируса используется для кодирования специфических аминокислот, за исключением очень небольшого фрагмента ДНК, имеющего, возможно, регуляторную функцию. Относительное расположение многих генов аденовирусов можно определить генетическими методами, поскольку заражение одной клетки несколькими частицами с разными генетическими свойствами приводит к появлению рекомбинантов. В последнее время для определения расположения отдельных генов вдоль молекулы ДНК был использован ряд генетических и биохимических подходов (рис. 20-19); можно надеяться, что через несколько лет будет установлена точная локализация каждого гена аденовируса.
РАННИЕ И ПОЗДНИЕ 1'ЕНЫ
В течение первых нескольких часов инфекции функционирует только несколько генов аденовирусов (ранние гены); подавляющее большинство генов (поздпие гены) нключвется только после того, как ранние гены сыграют какую-то жизненно важную, но пока еще неведомую роль Коиа начинает накапливаться поздняя мРПК, ранняя мРНК не исчезает и сохраняется в теченне всего жизненного цикла вируса. В отличие от фага Т7, у которого молекула ДНК примерно того же размера, ранние мРНК аденовирусов кодируются пе смежными областями ДНК. Две раннио мРПК кодир.мотся Л-цепыо, а две flpjme - i-цепью (рис. 20-19) Поздние мРНК синтезируются также на обеих цепях (по большей части на i-цени). Как происходит переключение с синтеза ранней mL’IIK па совместный
и
сиптез ранней и поздней мРНК аденовируса, неизвестно. Можно думать, что иа каких-то этапн\ происходит процессинг гораздо более крупного предшественника. Новосинтезированные цепи мРНК, обнаруживаемые в ядре, значительно крупнее и гетерогенное, чем отдельные зрелые мРИН в цитоплазме, присоединяющиеся к рибосомам (создается впечатление, что они являются полными транскриптами либо либо Л-цепей)
ИНВЕРТИРОВАННЫЕ ПОСЛЕДОВАТЕЛЬНОСТИ НА КОНЦАХ ДНК АД Г НОВЦРУСОВ
Механизм, при помощи которого реплицируются лилейные молекулы аденовирусов, представляется весьма загадочным. Синтез ДНК обычпо асимметричен: матрицей служит только одна цепь, в результате чего образуются одноцепочечные хвосты, отходящие от двухценочечных родительских молекул. Одиночные цепи позже должны каким-то образом превращаться в двойные спирали (рис. 20-20).
Репликация, вероятно, может начаться на любом конце молекулы, поскольку последовательности нуклеотидов на обоих концах идентичны и их отличие заключается только в разной полярности. Почему эти две концевые последовательности (около 100 пар основании) тождественны,
Рис. 20-20. Схема, показывающая временное образование одяоцо почечных: 5'-хвостов на начальной стадии репликации ДНК адено-нируса.
[[а атом рисунке репликация идет только с левого конца, хотя вполне вероятно, что оса начинается и справа.
