Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Уотсон Дж. -> "Молекулярная биология гена" -> 276

Молекулярная биология гена - Уотсон Дж.

Уотсон Дж. Молекулярная биология гена — М.: Мир, 1978. — 706 c.
Скачать (прямая ссылка): molekulyarnayabiologiyagena1978.djvu
Предыдущая << 1 .. 270 271 272 273 274 275 < 276 > 277 278 279 280 281 282 .. 317 >> Следующая

РЕПЛИКАЦИЯ ДНК ВИРУСА SV40 НАЧИНАЕТСЯ П СТРОГО ОПРЕДЕЛЕННОМ МЕСТЕ
При электронно-микроскопическом изучении реплицирующегося вируса SV40 показано, что он сохраняет ковалентно замкнутую кольцевую форму на протяжении всего процесса репликации. Репликация начинается в одной точке (см. рис. 9-28 и 20-7); при этом две вилки движутся в противополож-ni.iv направлениях до тех пор, пока но встретятся. Примечательно, что стартовая точка находится вблизи от нромотороа (и может быть, и прямо в них), контролирующих синтез ранней и поздней мРНК вируса SV40 (см. ниже). Поэтому встает вопрос о том, действительно ли нуклеотидная последовательность, сигнализирующая «начало репликации ДНК», распил нае гея PH К-полимер азой.
ННЛЮЧЕНИЕ ПОЗДНЕЙ РНК-ПОЛИМЕРАЗЫ ВИРУСА SV40
mI’FIK, кодирующая структурны# белок вируса SV40, начинает накапливаться в то же самое время, когда запускается репликация ДНК. Она кодируется 1-цепью (от англ. late — поздний) ДНК и синтезируется, следовательно, в нанран.'п-нии по часовой стрелке (в отличие от ранней мРНК, синтез которой идет против часовой стрелки). Участок ДНК, на котором происходит транскрипция, кодирует только раннюю или поздпюю PI1K; большая часть, если не вся ДНК, по-кидимому. содержит информации* для аминокислотных последовательностей. Это может означать, что 5'-концы ранней и поздней РНК вируса SV40 кодируются близко расположенными нуклеотидами (рис. 20-7).
Суть дела, однако, может быть п нс столь простой, поскольку поздннн мРНК, изолированная из ядер, значительно крупнее, чем мРНК, обнаруживаемая в цитоплазме в комплексе с рибосомами. Размер полисомной мРНК вируса SV40, возможно, частично отражает явление процессинга, происходящего в ядре и приводящего каким-то образом к деградации'тех последовательностей РНК, которые нс кодируют вирус-снецифические белки. Таким образом, первичная структура как 5'-, так и З'-концн мРПК, выделенной из полисом, совсем не обязательно соответствует последовательности стартового участка или стоп-сигпала транскрипции.
До сих пор ничего не известно о том, почему поздняя мРНК вируса SV40 накапливается только в самой поздней фазе. Сначала думали, что это должно свидетельствовать о синтезе в ранней фазе нового ст-подобного фактора специфичности траскриппии (Т-аптигена?), однако теперь нельзя исключать возможность того, что поздняя мРНК синтезируется рано,
однако быстро разрушается еще до соединения с рибосомами. Работа с использованием очищенной эукариотической РНК полимеразы П аред принятая для выяснении итого вопроса, не дала желаемых результатом, возможно из-за того, что в качестве препарата ДНК использовали очищенную ДНК вируса SV40. В настоящее время есть основания потагать. что ДНК вируса SV40 никогда по существует внутри ядра в свободном состоянии: при связывании с клеточными гистопами она быстро входит н состав хроматина. Можно надеяться, что изучение in vitro транскрипции ДНК вируса SV40 в составе хроматина прольет свет па механизмы регуляции синтеза поздней мРНК вируса SV40.
ТРАНСФОРМ\Ц1Ш ПРЕДШЕСТВУЕТ АБОРТИВНАЯ ИНФЕКЦИЯ
Многие из вирусных частиц SV'40, инфицирующих нспермиссивные метки ЗТЗ, проходят череп раннюю стадию репродукции. 11рн этом синтезируются ранняя мРНК, Г-антиген и некоторое количество вирусной ДНК. Однако никаких структурных белков вируса не образуется, хотя удается выявить значительное количество нрздпен мРПК (особенно в ядре). По каким-то пока неизвестным причинам иепермиссивные клетки не позволяют функционировать поздпей мРНК.
ТРАНСФОРМАЦИЮ КЛЕТКИ СПОСОБНА ВЫЗВАТЬ ОДП \ ЧАСТИЦА
При добавлении вирусных частиц SV'40 к непермиссивным клеткам число трансформированных клеток прямо нронорцпопально количеству введен пого вируса (рис. 2(1 10). Если определенное число частиц трансформирует одну клетку из тысячи, то число частиц, в десять раз большее, трансформирует одну клетку из ста. Это соотношение говорит нам о том, что одной частицы как таковой вполне достаточно для того, чтобы осуществить трансформацию. Bo.iee того, при добавлении достаточного числа частиц практически все используемые в эксперименте клетки способны транс формироваться. Этот факт свндетельстиует о том, что все растущие к культуре клетки способны подвергаться трансформации. Однако вероятность
т
О.
Рис. 20-16. Линеипая зависимость числа трансформированных пспсрмиссшшых клеток j пт количества добавленного вируса SV40. Пла- “ то при высоких дозах вируса отражает несло-собность некой фракции (обычно 50—99%) с кспермисснвных клеток подвергаться транс- о формации. Значение такоп невосприимчивой у популяции клегок остается нелепым.
трансформации под воздействием одной частицы вируса SV40 крайне низка. Обычно для создавия 50 %-ной вероятности перехода клетки в раковое состояние необходимо наличие нескольких десятков тысяч инфекционные частиц.
В ТРАНСФОРМИРОВАННЫХ КЛЕТКАХ ЧАСТИЦЫ ВИРУСА SV40 ОТСУТСТВУЮТ
Инфекционные частицы вируса SV40 в трансформированных клетках не обнаруживаются. Конечно, ие удивительно, что ядра трансформированных клеток не заполвепы вирионами — ипачс клетка просто погибла бы. Дело, однако, в том, что не удается выявить вообще ни одной частицы Здесь имеет место очевидное сходство с лизогенизирующиыи вирусами бактерий (гл. 7). Лизогенизирующие фаги также имеют два возможных пути развития. Они способны либо размножаться и вызывать лизис клеток, либо встраиваться в хромосому клетки-хозяина в результате кроссинговера .
Предыдущая << 1 .. 270 271 272 273 274 275 < 276 > 277 278 279 280 281 282 .. 317 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed