Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
- субстрат для включения 35S04. В присутствии ОНФ-р-О-ксилозида включение
35S04 нечувствительно к циклогексимиду, следовательно, в этом случае
включение не должно зависеть от синтеза белка. Сходство ОНФ-P-D-ксилозида
с серин-ксилозой позволяет считать (справедливо), что ОНФ-Р-О-ксилозид
служит затравкой при формировании полисахаридных цепей. (Вспомните, что
во всех случаях 35S04 находится в гликозаминогликанах.)
Б. Большое количество материала, меченного 35S04, оказывается в среде
в присутствии ОНФ-Р-О-ксилозида потому, что этот материал не может
включаться во внеклеточный матрикс ткани. Одна полисахаридная цепь, даже
достигшая обычных размеров, чего в данном случае нет, слишком мала по
сравнению с протео-гликаном, к которому она присоединена в норме.
B. ОНФ-Р-О-ксилозид служит затравкой для присоединения сахаров, а
ОНФ-а-О-ксилозид-нет, что следует из его неспособности блокировать
включение метки в ткань или стимулировать накопление метки в среде (табл.
14-2). По-видимому, трансфераза сахаров, ответственная за добавление
очередного углеводного остатка в цепь, проявляет специфичность в
отношении (3-связи между ксилозой и соединенной с ней группой.
Г. ОНФ-(3-0-ксилозид может блокировать развитие слюнных желез в
культуре ткани двумя путями. С одной стороны, в результате конкуренции с
сахарами за присоединение к сердцевинному белку (обратите внимание на
уменьшение количества метки в ткани, табл. 14-2) он может изменить
содержание протеогликана во внеклеточном матриксе так, что клетки слюнных
желез не смогут развиваться. С другой стороны, повышение концентрации
свободных полисахаридных цепей может приводить к конкуренции за участки
связывания протеогликана на поверхности клеток слюнной железы.
Литература: Thompson, Н.Л.; Spooner, В. S. Inhibition of branching
morphogenesis and alteration of glycosaminoglycan biosynthesis in
salivary glands treated with p-D-xyloside. Dev. Biol. 89; 417-424, 1982.
14-12
А. Индивид, гетерозиготный по делеции гена а1(1)-цепи, имеет один
нормальный ген и полностью лишен другого, поэтому молекулы коллагена типа
I будут нормальными. Однако у таких индивидов вырабатывается только
половина от обычного числа молекул коллагена.
Если цепь коллагена а 1(1) с точковой мутацией может встроиться
в молекулу коллагена, то нормальными будут только около 25% молекул
коллагена. Вероятность включения нормальной цепи в каждую из двух позиций
молекулы коллагена типа I составляет (1/2) (1/2) = 1/4.
Если цепь коллагена а 1(1) с точковой мутацией не может
встроиться в молекулу коллагена, то результат будет тот же самый, что и в
случае делеции гена.
Б. Гетерозиготный индивид с одной делецией гена а1(Ш)-цепи будет
иметь абсолютно нормальный коллаген типа III, но в половинном от обычного
количестве.
Если цепь коллагена а 1(111) с точковой мутацией может
встроиться в молекулу коллагена, то нормальными будут только (1/2)
(1/2) (1/2) = 1/8 молекул коллагена типа III.
В. Расчеты в пунктах А и Б показывают, что потенциально точковые
мутации значительно вреднее, чем делеции. Если при точковых мутациях
вырабатываются продукты, которые включаются в молекулы коллагена, то
гетерозиготная особь будет иметь исчезающе мало нормальных коллагеновых
фибрилл. Напротив, индивид с одной делецией гена будет иметь 50% от
обычного количества нормальных молекул коллагена, т.е. 50% обычного
количества нормальных коллагеновых волокон. Таким образом, более
вероятно, что точковые мутации, а не делеции являются доминантными и
приводят к проявлению мутантного фенотипа.
Литература: Sykes, В. The molecular genetics of collagen. Bioessays
3, 112-117, 1985.
-13
A. Трехкратное увеличение мол. массы, наблюдаемое в случае, когда
оставались интактными дисульфидные связи, показывает, что устойчивые к
трипсину пептиды в каждой частично восстановленной молекуле коллагена
удерживаются вместе дисуль-фидными связями.
Б. Поскольку pN-коллаген типа III и коллаген типа III дают одинаковые
наборы фрагментов после обработки трипсином, их устойчивые пептиды почти
наверняка идентичны. Следовательно, если все устойчивые к трипсину
пептиды связаны дисульфидными мостиками, то искомые связи-это те, что
находятся на С-конце, т.е. характерные для коллагена типа III.
B. Если бы сборка при восстановлении начиналась в случайных местах, то
набор фрагментов был бы более сложным. Главное же то, что некоторые из
устойчивых пептидов не содержали бы участки для дисульфидной связи на С-
конце. Из-за этого мол. масса таких не образующих дисульфидной связи
пептидов не могла бы увеличиться. Однако все устойчивые пептиды содержат
дисульфидную связь, поэтому сборка не должна начинаться в случайном
месте. Таким образом, сборка начинается, вероятно, в специфическом
участке, который располагается вблизи от дисульфидной связи на С-конце.
Г. Постепенное возрастание размеров фрагментов с увеличением времени
