Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
В. Специфичность связывания малых пептидов открывает возможность
использования аффинной хроматографии для выделения рецептора
фибронектина, и эта стратегия была успешно применена. Сначала пептид,
содержащий связывающую рецептор последовательность RGD, сорбировали на
матриксе колонки, в данном случае на сефарозе. Затем через колонки
пропускали растворенные детергентами белки плазматической мембраны,
соблюдая условия, способствующие взаимодействию между рецептором и
фибронектином. Далее колонку тщательно промывали для удаления несвязанных
белков. Наконец, рецептор снимали с колонки, добавляя к отмывающему
буферу пептид GRGDSP. При этом элюировался единственный белок с мол.
массой 140 кДа. (Если использовали GRGESP, этого не происходило.)
Литература: Pierschbacher, M.D.; Ruoslahti, Е. Cell attachment
activity of fibronectin can be duplicated by small synthetic fragments of
the molecule. Nature 309, 30-33, 1984.
Pytela, R.; Pierschbacher, M.D.; Ruoslahti, E. Identification and
isolation of a 140 kd cell surface glycoprotein with properies espected
of a fibronectin receptor. Cell 40, 191-198, 1985.
Ruoslahti, E. Pierschbacher, M.D. Arg-Gly-Asp: a versatile cell
recognition signal. Cell 44, 517-518, 1986.
-15
А. При анализе гена коллагена а 1(1) исследуемого гена получаются
идентичные наборы фрагментов мРНК, следовательно, весьма вероятно, что
исследуемый ген является геном коллагена а 1(1). Разумеется, хотелось бы
убедиться в этом, показав, что тестируемый зонд гибридизуется
непосредственно с зондом а 1(1).
Результат идентификации поврежденного гена несколько удивителен,
поскольку коллаген типа I, компонентом которого является продукт данного
гена, обнаруживается главным образом в коже, сухожилиях, костях, связках
и внутренних органах. Основным коллагеном в кровеносных сосудах является
коллаген типа III (см. МБК, табл. 14-3). По-видимому, коллаген типа
I важен для поддержания целостности кровеносных сосудов, по крайней
мере на ранней стадии развития.
Клеточная адгезия, контакты, матрикс 497
Б. Скрещивание между гетерозиготами приведет к простому менде-
левскому расщеплению. До проявления летального эффекта 25% зародышей
будут гомозиготны по неповрежденному гену (набор 1), 25%-гомозиготны по
поврежденному гену (набор 3) и 50%-гетерозиготны (набор 2). Поскольку
набор 3 не проявляется у живых новорожденных, то одна треть из них будут
гомозиготны по неповрежденному гену (набор 1), а две трети-гетерозиготны
(набор 2).
В. Клонирование неповрежденного гена, соответствующего гену с
ретровирусной вставкой,-это прямой и очень плодотворный подход. Ниже
приводится основная методика.
1. Приготовить библиотеку геномной ДНК мыши, несущей ретровирусную
вставку. Использовать рестриктазу, разрезающую ДНК вне ретровирусных
последовательностей.
2. Используя в качестве зонда ДНК ретровируса, провести скрининг
библиотеки для обнаружения клонов, содержащих ретровирусные
последовательности.
3. Субклонировать сегмент клеточной ДНК, фланкирующий
(окаймляющий) ретровирусные последовательности. (Существенно, чтобы эта
ДНК не содержала повторяющихся последовательностей.) Эта фланкирующая ДНК
содержит интересующий ген.
4. Субклонированную клеточную ДНК использовать для скрининга
библиотеки геномной ДНК (и/или библиотеки кДНК), полученной от нормальных
мышей. Эти клоны содержат в неизмененном виде интересующий ген.
Литература: Jaenisch, R.; Harbers, К.; Schnieke, Л.; Lohler, J.;
Chumakov, I; Jahner, D.; Grotkopp, D.; Hoffmann, E. Germline integration
of Moloney murine leukemia virus at the Mor 13 locus leads to recessive
lethal mutation and early embryonic death. Cell 32, 209-216, 1983.
Schnieke, A.; Harbers, K.; Jaenisch, R. Embryonic lethal mutation in mice
induced by retrovirus insertion into the al(I) collagen gene. Nature 304,
315-320, 1983.
Межклеточное узнавание и адгезия
14-16
A. слизевики, или миксомицеты
Б. хемотаксис
B. дискоидин-1
Г. контактный сайт В; контактный сайт А
Д. гомофильное; гетерофильное
Е. N-CAM; L-CAM Ж. Е-кадгерин
14-17
А. Неправильно. Утверждение, вероятно, правильно по духу, но оно
ошибочно в деталях. Уоррен Льюис, который был пионером клеточной
биологии, пытался привлечь внимание к важности адгезивных свойств клеток
в тканях в то время, когда эту проблему полностью игнорировали
современные ему биологи. Большую часть нашего тела составляет
соединительная ткань, целостность которой зависит от качества матрикса, а
не от заключенных в нем клеток (не так-то легко разъединить клетки ткани,
что может подтвердить каждый, кто ел жесткий бифштекс).
Б. Правильно.
В. Неправильно. В норме развитие тканей не связано с сортировкой
смешанных случайным образом клеток разных типов.
Г. Правильно.
Д. Неправильно. Антитела к большинству компонентов клеточной
поверхности не подавляют адгезию клеток. Насколько это известно, только
