Молекулярная биология клетки - Уилсон Дж.
ISBN 5-03-001999-5
Скачать (прямая ссылка):
(рис. 13-6). В первом случае плавный ход кривой свидетельствует о том,
что для возникновения двухсторонней ретинобластомы достаточно одного
событии, Напротив, наличие "плеча" на кривой для односторонней
ретинобластомы говорит о том, что для возникновения такоп поражения в
одном нейроне должно произойти несколько событий. (Плечо указывает на то,
что события накапливаются постепенно. Например, если необходимы два
события, то в большинстве клеток в ранний период времени происходит
только ода событие, что не приводит к возникновению опухоли. С течении
времени возрастает вероятность, что в уже пораженной клети случится
второе событие и, следовательно, возникнет от-холь.)
Для объяснения этих наблюдений можно предположить сж дующее.
Опухоль развивается в том случае, если обе копии геш ретинобластомы (Rb)
утрачены или содержат мутации. В случае наследственной (двухсторонней)
формы этого заболевания ребенок получает дефектный ген Rb от одного из
родителей, и если в какой-либо нервной клетке одного глаза другая копия ]
утрачивается в результате соматической мутации, то в этом глазу возникает
опухоль. В действительности утрата копии гена случается довольно часто,
поэтому опухоли обычно развиваюта в обоих глазах. Если ребенок получает
две хорошие копии геш Rb, то опухоль в глазу возникнет только в том
случае, еси в одной и той же клетке будут утрачены обе копии. Поскольк;
такая двойная потеря случается очень редко, то опухоль по(r) ляется обычно
только на одном глазу.
Чтобы проверить эту гипотезу, вы исследуете с помощь" клона
кДНК гена Rb структуру гена в клетках от здоровых люде! и от больных с
односторонней и двухсторонней ретинобласто-мой. Как показано на рис. 13-
7, у здоровых людей имеютси четыре рестрикционных фрагмента, которые
гибридизуются кДНК-зондом (это означает, что каждый из этих фрагмента
содержит по крайней мере один экзон). Фибробласты (неопух" левые клетки)
от обоих больных также содержат эти четыре фрагмента, хотя количество
трех фрагментов от ребенка с двухсторонней ретинобластомой вдвое меньше,
чем в норме. В опухолевых клетках обоих больных отсутствуют некоторые
рестрикционные фрагменты.
Рост и деление клеток 251
Рис. 13-7. Результаты блот-гибри-дазации рестрикционных фрагментов гена
ретинобластомы (задача 13-21). А. Картины гибридизации (Саузерн-блот) у
здоровых людей и в случаях заболевания односторонней или двухсторонней
ретинобластомой. Более светлая окраска полос указывает на вполовину
меньшее, чем в норме, число гопий. Б. Расположение рестрикционных
фрагментов. Фрагменты, содержащие экзоны (показанные в виде
прямоугольников), гибри-дизуются с кДНК, использованной качестве зонда в
этих опытах.
А. Саузерн-блот
Размер
фрагмента,
т.п.н.
Нормальные
фибробласты
Больной с
двухсторонней рети нобл асто мо й
Олухолевые клетки Фибробласты
Больной с
односторонней ретинобластомой
Опухолевые клетки Фибробласты
Б.
Рестрикционная карта 7,5
5,3 9,8
СИПИ
6,2
Размеры и положение рестрикционных фрагментов в гене
ретинобластомы
A. Объясните, почему фибробласты и опухолевые клетки от одного и того
же больного дают разные распределения полос?
Б. Какова структура генов Rb в фибробластах и опухолевых клетках от
двух больных?
B. Согласуются ли эти результаты с гипотезой о том, что ретино-
бластома обусловлена утратой гена Rbl
Г. Каким образом отсутствие продукта гена Rb может быть причиной
развития ретинобластомы?
Время после полового созревания, сут
I Рис. 13-8. Относительное количест-| самок мышей без опухоли как I
функция времени после полового (созревания (задача 13-22).
13-22 Образование опухолей-это многостадийный процесс, который может
включать в себя последовательную активацию нескольких онкогенов.
Подтверждением такому представлению служит следующее наблюдение.
Некоторые пары онкогенов, наиболее исследованными среди которых являются
ras и туе, более эффективно трансформируют культивируемые клетки, чем
каждый из них в отдельности. Подобные эксперименты с парами онкогенов
теперь осуществлены на трансгенных мышах. В одном эксперименте онкоген
ras был поставлен под контроль промотора MMTV (mouse mammary tumor virus-
вирус опухоли молочной железы мышей) и введен в клетки зародышевой линии
нескольким трансгенным мышам. Во втором опыте в такие клетки нескольким
трансгенным животным был введен онкоген туе под контролем того же
промотора MMTV. В третьем опыте мыши, содержащие одиночные онкогены, были
спарены между собой для получения мышей с двумя онкогенами.
