Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
Работа 3. НАБЛЮДЕНИЕ ПРИЗНАКОВ ПОВРЕЖДЕНИЯ КЛЕТКИ (ПОВЫШЕНИЕ СРОДСТВА К КРАСИТЕЛЯМ И ОСТРУКТУРИВАНИЕ ЯДРА И ЦИТОПЛАЗМЫ)
Вводные пояснения. Цитоплазма обладает сложной прижизненной структурой, с которой связаны ее свойства и функции. Важнейшее из этих свойств — избирательная проницаемость. Живая цитоплазма не удерживает в себе витальные красители, которые через нее свободно проходят в вакуоль и окрашивают клеточный сок.
После гибели или повреждения клетки красители задерживаются в самой цитоплазме в результате изменений нативиой (прижизненной) структуры белков. Цитоплазма приобретает соответствующую окраску.
Порядок работы. Кусочек эпидермиса чешуи непиг-ментированной луковицы лука выдерживают в слабом растворе нейтрального красного в течение 20 мин. После окрашивания кусочек эпидермиса помещают на предметное стекло в каплю воды, накрывают покровным
стеклом и рассматривают под микроскопом сначала при малом, а затем при среднем увеличении.
У живых клеток вакуоли окрашиваются нейтральным красным в малиновый цвет, цитоплазма и ядро не окрашиваются. У мертвых клеток цитоплазма и ядро окрашиваются этим красителем. Не снимая препарат со столика микроскопа, фильтровальной бумагой отсасывают воду из-под покровного стекла и вводят под него каплю 1 М раствора КМ03. После этого наблюдается плазмолиз клеток, накопивших краску в вакуолях, следовательно, клетки живые.
Что1бы проследить за изменениями в клетке при ее повреждении и гибели, применяют сильный яд — аммиак. Изнпод покровного стекла I<N03 отсасывают и заменяют каплей 10%-го раствора аммиака. Окраска среза становится желтой, так как в присутствии аммиака кислая реакция клеточного сока изменилась на щелочную (в щелочной среде нейтральный красный имеет желтый цвет). В погибших под действием аммиака клетках цитоплазма и ядро приобретают видимую в микроскоп структуру и окрашиваются в желто-бурый цвет.
Зарисовывают: живые клетки лука, накопившие нейтральный красный в вакуолях; эти же клетки, плазмо-лизированные в 1 М растворе I<N03; клетки лука с ост-руктуренными и окрашенными цитоплазмой и ядром, убитые аммиаком. Делают выводы по результатам работы.
Материалы и оборудование. Луковица лука с белыми чешуя-ми, раствор нейтрального красного’” (1 : 1000), 1 М раствор I<N03, 10%-й раствор NH4OH.
Химические стаканы па 100 мл, микроскопы, предметные и покровные стекла, пинцеты, стеклянные палочки.
Работа 4. ДИАГНОСТИКА ПОВРЕЖДЕНИЯ РАСТИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ПО УВЕЛИЧЕНИЮ ЕЕ ПРОНИЦАЕМОСТИ
Вводные пояснения. Избирательная проницаемость — свойство живой цитоплазмы сохранять постоянство внутриклеточной среды. При повреждении клетки цитоплазма теряет это свойство, и вещества, находящиеся в клеточном соке, свободно выходят наружу. Степень повреждения коррелирует с. количеством выделяющихся в водную среду веществ. Таким образом, интенсивность выхода веществ из клетки служит критерием ее повреждения.
ь
Выделившийся из поврежденных клеток пигмент ан-тоциан легко учесть колориметрическим способом.
Порядок работы. Из очищенного корнеплода красной свеклы сверлом диаметром 0,7.. .0,8 см берут куски цилиндрической формы высотой 4 см. Их тщательно промывают под струей водопроводной воды и помещают по одному в пять пробирок, содержащих по 10 мл различных растворов в соответствии со схемой опыта.
Вариант опыта с кипячением выполняют следующим образом. В колбу с кипящей водой бросают один из приготовленных кусочков. Через 2 мин кусочек вынимают, охлаждают и опускают в пробирку с 10 мл холодной водопроводной воды.
Через 30 мин после начала опыта все пробирки интенсивно встряхивают, кусочки свеклы извлекают и сравнивают количество вышедшего из клеток пигмента в разных вариантах опыта при помощи фотоэлектроколориметра (ФЭК) на синем светофильтре. При этом в контрольную кювету ФЭК наливают тот раствор, действие которого изучают. Интенсивность окраски устанавливают по коэффициенту экстиикции на шкале ФЭК*.
Для наблюдения за состоянием клеток из кусочка свеклы контрольного варианта и варианта с наиболее интенсивным выходом веществ готовят тонкие срезы, помещают их на предметные стекла в каплю 1 М раствора KNO3, накрывают покровным стеклом и рассматривают под микроскопом. Зарисовывают клетки срезов двух вариантов, находящиеся под действием плазмоли-тика. Результаты опыта записывают по форме (табл. 2).
2. Форма записи результатов
Наименование
После Водопро
Контроль вод! ая 30 %-й
(водопро кипячепня вода+ раствор
водная +6 капель уксуспий
пода) ВОДИ<1Я хлоро кислоты
вода) форма
50 к-й pacrgop еппрга
Иитспсшшость окраски раствора (коэффициент экстиикции по шкале ФЭК)
По материалам наблюдений делают выводы о степени повреждения цитоплазмы.
* Определение па фотоэлектроколорпметре описано в работе 39.
Материалы и оборудование. Красная свекла, хлороформ, 30%-й раствор уксусной кислоты, 50%-й раствор спирта, 1 М раствор KN03.
Штативы с пятью пробирками, конические колбы, сверла, линейки, пипетки с делениями на 10 мл, предметные и покровные стекла, микроскопы, ФЭК.
