Практикум по физиологии растений - Третьяков Н.Н.
ISBN 5-10-001653-1
Скачать (прямая ссылка):
Работа 5. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ СЕМЯН ПО ОКРАШИВАНИЮ ЦИТОПЛАЗМЫ
Вводные пояснения. При повреждении растительной ткани увеличивается сродство цитоплазмы к красителям.' На этом основаны методы определения жизнеспособности семян по окрашиванию их зародышей витальными красителями. Жизнеспособными считаются те семена, зародыши которых не окрашиваются,
Порядок работы. Метод Н е л ю б о в а. Этим методом устанавливают жизнеспосо'бность семян гороха, фасоли, люпина, конопли и тыквенных.
Берут 10...15 семян гороха, предварительно намачивают в течение 18 ч при 20 °С, освобождают от семенной оболочки, помещают в 0,2 %-й раствор индиго-кармина на 2.. .3 ч при 30 °С. Затем краску сливают, промывают семена водой и устанавливают их жизнеспособность.
Семена с неокрашенными корешками и слабо окрашенными семядолями относят к жизнеспособным. Семена с полностью окрашенными корешками и семядолями признают нежизиеспосббными.
Метод Иванова. Для определения берут десять зерновок пшеницы, предварительно намачивают в воде в течение 10 ч при комнатной температуре, разрезают бритвой вдоль бороздки пополам и помещают иа 15 мин в 0,2%-й раствор кислого фуксина или 0,1 %-й раствор индиго-кармина, налитый в стаканчик или бюкс. Краску сливают, промывают семена водой, размещают пинцетом на фильтровальной бумаге и определяют'жизнеспособность. У жизнеспособных семян зародыши не окрашены, у мертвых или сильно поврежденных окрашены более или менее интенсивно.
Зарисовывают жизнеспособные и нежизнеспособные семена. По результатам работы делают выводы.
Материалы и оборудование. Семена гороха и пшеницы, 0,2%-й п 0,1 %-й растворы ппдиго-кармниа или 0,2%-й раствор кислого фуксина. Бюксы, нннце-ш, фильтровальная бумага, бритвы, 'препаровальные иглы.
Работа 6. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИЗОЭЛЕКТРИЧЕСКОЙ ТОЧКИ РАСТИТЕЛЬНЫХ ТКАНЕЙ КОЛОРИМЕТРИЧЕСКИМ МЕТОДОМ
Вводные пояснения. Аминокислоты и белки цитоплазмы— амфотерные вещества. В растворе они диссоциируют и как кислоты, и как основания. Белки и аминокислоты схематично можно представить в следующем виде:
, iCGG-R <
NJ Ь+
Чем выше концентрация водородных ионов в среде, тем более подавлена кислотная диссоциация, и белок приобретает больший положительный заряд:
, соо- . соон
R\ +H+^R<Q (I)
NH3+ NH3+
Чем больше концентрация гидроксильных ионов, тем в большей степени подавлена основная диссоциация, и белок приобретает больший отрицательный заряд:
R/COO- +0H__sR/C00-+H20 (И)
\ 1NH3+ ni-i2
При определенной величине pH среды диссоциация по уравнениям, I и II подавлена в одинаковой степени. Количество положительных и отрицательных зарядов уравновешивается. Амфолит* становится электроиейт-ральным. Данное значение pH среды называют изо-электрической точкой ,(ИЭТ).
Каждый амфолит имеет свою величину ИЭТ. У белков и аминокислот она зависит от количества свободных кислотных (карбоксильных), основных (амииных) групп. Зная ИЭТ белков, можно судить о соотношении в их составе кислых и основных амино'кислот. В тех случаях, когда в растворе амфотерного соединения диссоциация идет по типу основания (в средах с pH ниже ИЭТ), положительный заряд будет связывать анионы. Если диссоциация идет по кислотному типу (в средах с pH выше ИЭТ), отрицательный заряд связывает катионы.
* Молекула амфотерного соединения в состоянии диссоциации.
Для определения изоэлектрической точки растительной ткани применяют кислый краситель эозин, у которого розовой окраской обладает анион, и основной краситель метиленовую сишою (МС), цвет которого обусловлен катионом. При окрашивании амфотерпого соединения этими красками и погружении в среды, pH которых ниже ИЭТ, связываются преимущественно анионы эозина. Поэтому раствор приобретает розовую окраску. В среде, где pH выше ИЭТ, амфолит удерживает катион метиленовой синей и окрашивается в синий цвет. В среде с pH, равным ИЭТ, окраска амфолита будет промежуточной между розовой и синей — фиолетовой, так как в этом случае количество отрицательных и положительных зарядов одинаково.
В цитоплазме содержится смесь растворов амфотс.р-'ных соединений, поэтому переходная зона между розовой и синей окраской будет соответствовать более или менее широкому интервалу pH.
Порядок работы. В бюксах готовят по 10 мл буферных растворов со следующими значениями pH: 2,2; 3,0; 3,6; 5,0; 5,4; 6,0; 7,0; 8,0 (в соответствии с табл. 3).
3. Приготовление буферных растворов с различным pH
Номер pH 0,2 м 0,1 М лимонная
пробирки Na2HPOj, ыл кислота, мл
1 2,2 0,20 9,80
2 3,0 2,05 7,95
3 3,6 3,22 6,78
4 5,0 5,15 4,85
5 5,4 5,57 4,43
6 0,0 6,31 3,69
7 7,0 8,23 1,7 7
8 8,0 9,72 0,28
