Биология в 3 томах. Tом 2 - Тейлор Д.
ISBN 5-03-003686-5
Скачать (прямая ссылка):
Методика
После этой методики будет описана альтернативная методика с использованием корнеплода свеклы.
1. Пометьте 6 чашек Петри и 6 пробирок в соответствии со следующими концентрациями раствора сахарозы: 0,3 М; 0,35 М; 0,4 М;0,45 М; 0,5 M и 0,6 М.
2. Используя мерную пипетку, мензурку с дистиллированной водой и мензурки с 1 M раствором сахарозы, приготовьте растворы перечисленных выше концентраций (см. табл. 13.3) и залейте по 20 мл каждого из них в соответствующие пробирки.
3. Перемешайте растворы, энергично встряхивая пробирки (это очень важно), и разлейте их по чашкам Петри.
4. Лук. Отделите одну из мясистых чешуи луковицы. На ее внутренней стороне лезвием или скальпелем нарежьте 6 квадратиков со стороной около 5 мм. Пинцетом снимите с них слой эпидермиса и положите по одному такому лоскуту в чашки Петри. Осторожно перемешайте в них раствор, чтобы он полностью покрыл образцы ткани. Оставьте на 20 мин.
Ревень. Нарежьте на наружной стороне черешка 6 квадратиков со стороной около 5 мм, снимите с них лоскуты эпидермиса и обработайте, как описано выше для лука.
Таблица 13.3. Таблица разведения сахарозы в опыте 13.2
Концентрация раствора сахарозы, M
Объем
дистиллированной воды, мл
Объем 1M раствора сахарозы, мл
0,30
14
6
0,35
13
7
0,40
12
8
0,45
11
9
0,50
10
10
0,60
8
12
ММА им. И.М. Сеченова
Таблица 13.4. Осмотические потенциалы растворов сахарозы различной концентрации при 20 °С
Концентрация раствора сахарозы, M
Осмотический
потенциал,
кПа
Осмотический потенциал, атм
0,05
- 130
- 1,3
0,10
- 260
- 2,6
0,15
- 410
- 4,0
0,20
- 540
- 5,3
0,25
- 680
- 6,7
0,30
- 820
- 8,1
0,35
- 970
- 9,6
0,40
- 1120
- 11,1
0,45
- 1280
- 12,6
0,50
- 1450
- 14,3
0,55
- 1620
- 16,0
0,60
- 1800
- 17,8
0,65
- 1980
- 19,5
0,70
- 2180
- 21,5
0,75
- 2370
- 23,3
0,80
- 2580
- 25,5
0,85
- 2790
- 27,5
0,90
- ЗОЮ
- 29,7
0,95
- 3250
- 32,1
1,00
- 3510
- 34,6
1,50
- 6670
- 65,8
2,00
-11 810
-116,6
5. Выньте лоскут из 0,60 M раствора и с помощью кисточки расправьте его на предметном стекле в растворе такой же концентрации. Накройте покровным стеклом и рассмотрите под микроскопом.
6. При малом увеличении выберите участок с хорошо различимыми клетками. Переключаясь на среднее или сильное увеличение и перемещая препарат, определите состояние (плазмолизированное или не-плазмолизированное) первых 100 попавших в поле зрения клеток. Клетку считают плазмолизированной, если протопласт в ней хотя бы чуть-чуть отошел от клеточной стенки.
7. Повторите эту процедуру с остальными образцами, помещенными в соответствующие по концентрации растворы.
8. Подсчитайте процент плазмолизирован-ных клеток в каждом растворе. Постройте график, отложив по оси ординат процент плазмолизированных клеток, а по оси абсцисс — молярную концентрацию раствора сахарозы (см. рис. 13.5).
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2
104 Глава 13
БОТАНИКА
ММА им. И.М. Сеченова
Д. Тейлор, Н. Грин, У. Стаут. БИОЛОГИЯ, т. 2
§ X Концентрация раствора, M
Рис. 13.5. Доля плазмолизированных эпидермальных клеток лука при разных концентрациях сахарозы в растворе.
9. По этому графику определите молярность раствора, при котором плазмолизируется 50% клеток (рис. 13.5).
10. Используя данные из табл. 13.4, постройте график зависимости осмотического потенциала (по оси ординат) от молярной концентрации сахарозы (по оси абсцисс).
11. По этому графику определите осмотический потенциал раствора, приводящего к плазмолизу 50% клеток. Он считается равным среднему для них осмотическому потенциалу цитоплазмы.
Результаты
На рис. 13.5. приведен типичный график для эпидермиса лука. Для эпидермиса ревеня он примерно такой же.
/3.5. Каков осмотический потенциал
эпидермальных клеток лука, если 50% их плазмолизируется в 0,38 M растворе сахарозы?
Опыт с тканями свеклы
Корнеплод свеклы — менее удобный материал; однако если этот опыт объединить с опытом 13.3, то можно оценить гидростатический потенциал клеток ее корнеплода. Следует, впрочем, помнить, что водный и осмотический потенциалы у разных корнеплодов этой культуры могут быть разными. Обычно осмотический потенциал у свеклы ниже, чем у лука и ревеня, потому что в вакуолях у нее содержится больше Сахаров и неорганических солей.
_Транспорт у растений 105
Особенности методики следующие:
Этапы 1 — 3 те же, что и в опыте с луком и ревенем. Единственное отличие — это концентрации растворов: 0,4; 0,45; 0,5; 0,55; 0,6 и 0,7 М,
4. Вырежьте из корнеплода прямоугольный столбик квадратного сечения размерами примерно 5x5 мм. Лезвием сделайте тонкие квадратные срезы (не более 0,5 мм толщиной). Чем тоньше будут срезы, тем легче будет считать плазмолизированные клетки. Окрашенный клеточный сок облегчает подсчет клеток. Препараты следует делать непосредственно перед практическими занятиями и хранить их в дистиллированной воде. В ходе опыта поместите по нескольку срезов в приготовленные растворы разной концентрации на 30 мин. В это время рассмотрите под микроскопом такой же квадратик, находящийся в дистиллированной воде, чтобы ознакомиться с видом неплаз-молизированных клеток (края образца обычно бывают тоньше, и наблюдения поблизости от них вести легче). Некоторые поврежденные клетки могут оказаться обесцвеченными, а около проводящей ткани иногда будут видны более мелкие клетки. Их не следует включать в подсчет.
