Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
3 В результате происходящей окислительной реакции от поверхности сосудов отслаиваются остатки органических загрязнений и клеток, что позволяет не применять механическую обработку «ершом» н кипячение посуды, а соответственно будет меньше деформироваться поверхность изделия. Кроме того, гипохлорит натрия обладает дезинфицирующим свойством.
4 Детергент должен иметь нейтральное значение pH 7.0, чтобы избежать сильного коррозийного воздействия на поверхность стекла. Наиболее привлекательным
ш
N
Селективное выщелачивание} отсутствие защитной пленки
Рис. 3. Типы разрушающихся поверхностных структур стекла (по: [10]).
/—кварцевое стекло (SiOz— 100%); II — «Пирекс» (SiCb — 80%); Ш — стекло сложного состава с высоким содержанием SiOj, AI2O3, Ьа2Оз, Zr02 образует двойную защитную плеику силикатов (гидросиальиых) в поверхностном слое; IV — оконное, тарное, лабораторное стекло (S1O2 — 70 %; КгО — 5—10 %), слой поликремииевых кислот не выполняет защитных функций; V—растворяющиеся стекла (Si02 — 40%). 1 — раствор; 2 — граница «раствор—стекло»; 3 — защитная пленка; 4 — масса стекла,
э По оси абсцисс — расстояние от “ границы «раствор—стекло»; по оси ординат — масса стекла (концентрация Si02).
способом, так и в моечной машине с определенным режимом; 9) после мытья с детергентом необходимо тщательно ополоснуть горячей проявляется использование разработанного фирмой «Flow* (Англия) специально для мытья культуральной посуды детергента 7Х — для ручного способа или 7Х-0 (мало-пеиящаяся модификация 7Х) для мытья в машине. Другим детергентом такого же назначения является Calgolac производства фирмы «Calgon» (США). К сожалению, отсутствуют отечественные детергенты специального назначения для культуральной посуды. Взамен можно рекомендовать «Детское мыло», пасты «Ландыш» и «Триалои».
37
точной (до 10 раз при ручном способе) и проточной дистиллированной или деионизированной водой (не менее 5 раз при ручном способе); 10) вымытая посуда должна быть сразу же высушена, но при температуре, не превышающей 120 °С; 11) вымытая и высушенная посуда должна быть защищена от пыли и загрязнения, для чего ее заворачивают в плотную бумагу, которая не выделяет канцерогенных или токсичных соединений, или в алюминиевую фольгу (в Институте цитологии АН СССР используют мягкую алюминиевую фольгу марки А-5 толщиной 0.014—0.016 мм) и подвергнута стерилизации.
Пипетки проходят те же процедуры обработки и мытья, что и культуральная посуда, с небольшими изменениями: 1) замачивать пипетки в раствор гипохлорита удобно либо в высокий цилиндр, либо в высокий полиэтиленовый сосуд, предварительно положив на дно сосуда прокладку либо из хлопчатобумажной ваты, либо из поролона для предотвращения деформации пипеток; 2) хранить высушенные пипетки и стерилизовать удобно в металлических пеналах; 3) перед стерилизацией необходимо закрыть пипетку фильтром из ваты.
Укупорку культуральных сосудов — пробки или завинчивающиеся крышки — подвергают такой же обработке, как и всю посуду: 5 1) укупорку на этапе мытья с детергентом и последующим полосканием в горячей проточной воде можно подвергнуть кипячению; 2) после мытья укупорку следует рассортировать по размерам и разложить в чашки Петри, затем завернуть чашки в бумагу или фольгу; 3) стерилизовать (для этих изделий допустим только один способ стерилизации) автоклавированием в течение 30 мин при температуре'*121 °С.
Пластиковая посуда одноразового использования
Начиная с 1965 г. все больше применяется пластиковая посуда одноразового использования. Ассортимент ее все время увеличивается и постоянно модифицируется. Мотивы, вызвавшие использование пластиковой посуды, вероятно, могут заключаться в следующем:
1) производство такой посуды дешевле, чем стеклянной (экономически выгоднее, что позволяет удовлетворять возросшую потребность в связи с развитием исследований на культивируемых клетках);
2) свойства материала позволяют методом литья технологически достаточно просто изготавливать изделия любой конфигурации;
3) возможность выпускать стерильные изделия, сразу же готовые к использованию; 4) структура поверхности пластиковой посуды более пригодна для некоторых клеточных линий.
Характеристика и свойства материала. Различные полимерные материалы могут использоваться для изготовления посуды и пленок одноразового применения при культивировании клеток [12, 13, 14].
5 Укупорка сосудов для культивирования должна изготовляться из биологически ииертиого материала, ие выделяющего в среду никаких токсичных веществ. Материал должен выдерживать условия автоклавирования. Наиболее подходящим материалом для пробок и прокладок к завинчивающимся крышкам является силиконовая резина.
Наиболее предпочтительным является полистирол, получаемый в результате полимеризации стирола (табл. 5):
_СН2-СН(С6Н5)-СН2-СН(С6Н5)-
Полистирол прозрачен, прочен, имеет хорошую стабильность пространственной структуры, ударопрочен, высокоустойчив к водным растворам.
