Методы культивирования клеток - Вахтин Ю.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Способы стерилизации. Как уже говорилось выше, одним из преимуществ пластиковой посуды является возможность стерилизации ее в процессе изготовления. Способы стерилизации могут быть физической и химической природы.
Самый распространенный физический способ, применяемый в промышленности, — облучение v-лучами дозой 25 кГр (2.5 Мрад [14]). Все пластики выдерживают стерилизацию УФ-светом (не менее 30 мин) с длиной волны 254 нм. Но этот способ чаще всего применяется в лабораторных условиях, а в технологии только в профилактических целях для снижения инициального уровня контаминации изделий, поступающих на сборку, а также исходных материалов. Этот способ стерилизации с экономической точки зрения невыгоден [14].
Химическая стерилизация может быть выполнена с помощью газа и жидкостей. Газовая стерилизация осуществляется с помощью окиси этилена. Минимальная концентрация в стерилизационной камере составляет 450 мг/л в течение 6—16 ч. Повышение концентрации до 1000 мг/л позволяет сократить время стерилизации вдвое, но при этом стерилизация будет эффективней, если повысить температуру воздействия [14]. Можно использовать окись этилена в сочетании с бромистым метилом в течение 4—6 ч, но пары эти токсичны и приводят к деструкции материала [15]. В качестве стерилизующих жидкостей используют этиловый спирт (70—96 %-ный раствор, 15— 20 мин), раствор пергидроля (10 %-ный, 4—6 ч), формалин (5 %-ный раствор, 1 ч).
Способы обработки пластиковой посуды. Пластиковая посуда производится в двух модификациях — для культивирования микроорганизмов и для культивирования клеток.
Такое разделение вызвано тем, что культивируемые клетки (речь идет о монослойном культивировании) в отличие от бактериальных клеток находятся в непосредственном контакте с поверхностью сосуда, которая является для них субстратом. Клетки оседают на этой поверхности, прикрепляются и распластываются.
Для улучшения адгезионных свойств поверхности из полистирола ее подвергают специальной обработке, в то время как бактериологическая посуда не обрабатывается. Рабочая поверхность этих двух типов посуды различается по силе поверхностного натяжения и смачиваемости: бактериологическая — гидрофобна, культуральная — гидрофильна. По некоторым данным [16], наиболее пригодными для культивирования клеток могут быть поверхности, смачиваемость которых свыше 560 мкН/см, в то время как у полиамидных, полиэфирных и у некоторых других поверхностей эта величина не превышает
Свойства материалов, используемых для производства посуды
Материал Прозрачность Прочность Удельная масса Проницаемость
для газов *
Флюоропластик Матовая Низкая 2.10 130
Полиэтилен Достаточно » 0.92 7
хорошая
Полипропилен Высокая Средняя 0.90 2
Полистирол » Высокая 1.06 10
Поликарбонат *** Достаточно » 1.02 20
высокая ; 3
Полиэфир То же Средняя 1.12 0.10
Полиамид Достаточно » 1.14 0.05
хорошая 2.30
Стекло Высокая Высокая Никакой М
Нержавеющая Никакой » 7.90 Я
сталь 1
Таблица 5 (продолжение)
Материал Поверхностное Способ стерилизации Максимальная
натяжение,** температура
мкН/см обработки, °С
Флюоропластик 190 УФ, газовый, химический, авто- 250
клавирование
Полиэтилен 310 УФ, 7-лучи, химический 80---120
Полипропилен 310 УФ, газовый, химический, авто- 135
клавирование
Полистиред 330 УФ, газовый, 7-лучи, химиче 70
ский
Поликарбонат *** (?) УФ, газовый, автоклавирова- 135
иие, химический
Полиэфир 430 Автоклавирование (?)
Полиамид 460 То же (?)
Стекло 7000 Автоклавирование, сухо >200
жаровой
Нержавеющая 10 000 То же >200
сталь
