Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Если честь открытия метода тканевых культур принадлежит Harrison, то основную разработку, усовершенствование и введение его в широкую лабораторную практику осуществили Carrel с соавторами. Carrel и Burrows (1910) подобрали естественные среды для культивирования тканей теплокровных животных; применили сгусток плазмы вместо лимфы, обнаружили ростстимулирующее действие ку-
Ъ
риного эмбрионального экстракта. Они показали, что высаженный кусочек окружается зоной роста, состоящей из выселившихся клеток; заметили, что через несколько дней происходит разжижение плазмы и замедление роста. Оказалось, что для дальнейшего культивирования необходимо
Рис. 1. Основные приемы культивирования тканей.
/— культивирование в висячей капле в плазменном сгустке (Harrison, 1907); культивирование во флаконе Карреля в лежачей капле (Carrel, 1923); 3 — культивирование в висячей капле над луикой с двумя покровными стеклами (А. А. Максимов, 1929); 4 — культивирование иа поверхности плазменного сгустка на стейке .пробирки (Strangeways, Fell, 1923); 5— культивирование иа поверхности плазменного сгустка в часовом стекле (Fell, Robinson, 1929); 6— культивирование во вращающихся пробирках (Gey, 1933); 7 — различные методы моиослойиых культур; 8—различные методы суспензионных культур; 9 — различные методы органных культур.
каждые 2—3 дня переносить эксплантат в свежую питательную среду. Обязательным условием для получения длительно пассируемых культур являлось добавление эмбрионального экстракта. В лаборатории Carrel были получены «вечные» культуры из ткани сердца эмбриона цыпленка. Этот штамм поддерживался в течение 34 лет. При этом клетки сохраняли способность к пролиферации.
/
9
Трудно в полной мере оценить работу по постановке и поддерживанию культур в век до появления антибиотиков, ультрафиолетового облучения и искусственных сред. Только благодаря заслугам выдающегося хирурга Carrel стало возможным развитие метода культивирования тканей и введение его в биологию и медицину.
В первые годы существования тканевых культур были проведены физиологические и биохимические исследования роли отдельных факторов питательной среды: влияние концентрации солей, pH, температуры, осмотического давления. Был исследован обмен веществ культивируемой ткани, проводилось цитологическое изучение клеток в зоне роста.
Метод тканевых культур в 20-е годы получил широкое распространение. Его начали применять в своих исследованиях А. Кронтовский, А. А. Максимов, Н. Г. Хлопин, А. В. Румянцев, Strangeways, Fischer, Champy, Ephrussi, Levi. Работы каждого из них способствовали дальнейшему развитию методики и расширению круга изучаемых вопросов.
А. Кронтовский (1913) использовал для эксплантации в плазменном сгустке чашки Габрического, а в 1923 г. Carrel предложил специальные флаконы для тканевых культур. Флакон Карреля с плоским дном и оттянутым горлышком является удобным сосудом для культивирования ткани в плазменном сгустке в течение многих месяцев и даже лет. Его применение упрощает технику работы с тканевыми культурами, позволяет одновременно в большом количестве среды проводить культивирование многих кусочков.
В 1925 г. А. А. Максимов предложил метод двойного покровного стекла. По своей сути он имеет много общего с методом висячей капли, но в отличие от него стекло с кусочком в плазменном сгустке покрыто сверху другим стеклом (или слюдяной пластинкой) большего размера, что обеспечивает стерильность меньшего стекла. При разжижении плазменного сгустка достаточно промыть маленькое стекло с эксплантатом в солевом растворе, нанести каплю плазмы и эмбрионального экстракта и снова продолжать культивирование.
Дальнейшее усовершенствование плазменных культур — метод вращающихся пробирок — ввел Gey (1933). Пробирки с прикрепленными к стенкам при помощи плазмы кусочками помещают в специальный барабан, обеспечивающий их вращение. При этом жидкий компонент среды (разведенный эмбриональный экстракт, сыворотка) омывает эксплантат и перемешивается.
Метод культивирования в плазменном сгустке нашел применение для кроветворной и лимфоидной тканей в двух модификациях.
1. Небольшие фрагменты кроветворных органов заключают в плазменный сгусток, состоящий из чужеродной или аутологичной плазмы и тканевого экстракта (чаще эмбрионального). Сгусток прикрепляют к поверхности пробирок или ко дну чашек Карреля, или к покровному стеклу в чашках Максимова. В систему может быть добавлена жидкая культуральная среда, которую легко обновлять в ходе культивирования, не прибегая к пересеву кусочков, так как кроветворная ткань слабо разжижает плазменный сгусток.
2. В плазменный сгусток заключают клетки крови или суспензии клеток, приготовленных из кроветворных органов. Культивирование проводится по приведенным выше методикам.
В 50-х годах в связи с успехами в области химии появляются первые синтетические среды, в состав которых входят аминокислоты, витамины и другие биологически активные вещества. В это же время разрабатываются методы трипсинизации тканей. Это ознаменовало начало нового периода в эволюции тканевых культур: стало возможным выращивать большие количества клеток в монослойных и суспензионных культурах.
