Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
III. Культивирование на поверхности жидких сред. Предложено несколько методов, отличающихся не только составом питательной среды, но и поддерживающим суб-стратом, на который помещают ткань:
3
Рис. 4. Метод множественных органных культур.
/ — культивирование в чашке Коивея иа маленьких фильтрах; 2 — культивирование на большом фильтре и иа маленьких в одном сосуде (дает возможность применять фильтры различных типов и позволяет изучать гуморальные межтканевые взаимодействия): 3 — культивирование иа большом фильтре (обеспечивает получение значительного количества клеток).
1) культивирование на металлической сеточке-подставке предложил Trowell (1954). Для того чтобы предотвратить контакт ткани с металлом, на подставку накладывают специальную бумагу или наносят слой 2% агара (Trowell, 1959);
2) культивирование на плоту из папиросной бумаги (Chen, 1954). Для того чтобы плот не тонул, Richter (1958) предложил покрыть папиросную бумагу силиконом;
3) культивирование на миллипорных фильтрах. Этот способ органного культивирования, предложенный и разработанный Grobstein (1953, 1956), обладает рядом преимуществ; в качестве поддерживающего субстрата применяются миллипорные фильтры, имеющие строго определенные размер пор и толщину. Пластмассовое кольцо с наклеенным на него фильтром устанавливают над лункой, содержащей питательную среду. На одном фильтре проводится культивирование 1—2 эксплантатов;
4) культивирование на миллипорных фильтрах по методу множественных органных культур позволяет одновременно на одной питательной среде выращивать большое количество эксплантатов (Е. А. Лурия и др., 1966, 1967). В качестве сосуда для культивирования используется чашка Конвея; квадратики миллипорных фильтров площадью 49 мм2 под-
держиваются над питательной средой при помощи пластмассовой платформы с отверстиями (рис. 3, 4).
Практически все перечисленные методы культивирования нашли свое применение при эксплантации лимфоидной и кроветворной ткани. При этом оказалось, что столь сложные и гетерогенные по составу ткани ведут себя по-разному в зависимости от приема культивирования. Поэтому использование различных методов эксплантации дает возможность наблюдать лимфоидную и кроветворную ткани с разных сторон. Замечательно, что основные отличия при культивировании различных лимфоидных и кроветворных тканей определяются главным образом методом эксплантации, а не морфологией самих эксплантированных тканей. В условиях культивирования проявляются общие черты строения, присущие всем кроветворным и лимфоидным тканям.
Данное исследование посвящено анализу результатов, полученных при культивировании только нормальной лимфоидной и кроветворной ткани в длительных культурах.
Значительную часть материалов этой книги составляют собственные результаты автора н материалы, полученные его коллегами по лаборатории иммуноморфологии Института эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи АМН СССР. Автор пользуется возможностью принести свою благодарность руководителю лаборатории А. Я. Фриден-штейну за критические замечания и советы при подготовке рукописи.
Глава I
КРОВЕТВОРНАЯ ТКАНЬ IN VITRO
В эмбриогенезе высших позвоночных кроветворные элементы впервые появляются в желточном мешке, затем очажки кроветворных клеток формируются и в мезенхиме эмбриона. Следующий важный этап в развитии гемопоэза — кроветворение в печени эмбриона, которое затем переносится в костный мозг, служащий в течение всей дальнейшей жизни основным кроветворным органом у млекопитающих и птиц. Каждая из этих стадий развития кроветворной ткани протекает по-разному при использовании различных приемов эксплантации.
1. КРОВЕТВОРНАЯ ТКАНЬ В УСЛОВИЯХ ПЛАЗМЕННОГО СГУСТКА
При культивировании в плазменном сгустке бластодермы куриных эмбрионов на стадии 3—18 сомитов было получено развитие из мезенхимных клеток кровеносных сосудов в виде изолированных островков, которые затем сливались в единую систему (McWhorter, Whipple, 1912).
Превращение мезенхимных клеток в кроветворные, а также образование сосудов и островков кроветворных элементов можно наблюдать и при культивировании бластодермы эмбрионов в растворе Локка —Льюиса (Sabin, 1921). Хотя данный метод позволил проводить прижизненные исследования культур под большим увеличением, существенный недостаток его состоит в малой жизнеспособности культур. Срок наблюдения над индивидуальной культурой ограничивался 4—5 часами.
В культурах желточного мешка 6 — в'/г-дневных эмбрионов кролика процесс образования кроветворных элементов оказался аналогичным тому, который происходит в желточном мешке in vivo (А. А. Максимов, 1909, 1925).
В культурах печени эмбрионов человека (от 1 до З'/г месяцев внутриутробного развития) наблюдается гранулопоэз и эритропоэз (С. В. Беневоленская, 1929). Культивирование проводилось в сгустке плазмы с добавлением экстракта, приготовленного из эмбриона, печень которого использовалась для эксплантации. В некоторых культурах наблюдалось развитие капилляров, содержащих большое количество эритроцитов. В эксплантатах в течение первой недели можно проследить последовательные стадии эритроидного кроветворения. На 2-й неделе культивирования сосуды содержали только зрелые эритроциты.
