Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
поминают клетки диплоидных штаммов, они легко снимаются со стекла и содержат тонофибриллы в цитоплазме. Все это четко отличает их от гистиоцитов.
При культивировании костного мозга различных видов животных наблюдаются те же фазы роста, однако их продолжительность может значительно колебаться. Так, в культурах костного мозга мышей и крыс вслед за исчезновением кроветворных элементов в течение нескольких недель одновременно присутствуют и гистиоциты и фибробласты, т. е. элементы, характерные соответственно для второй и для третьей фазы роста. Чистая популяция фибробластоподоб-ных клеток, свойственных третьей фазе, появляется спустя длительный период — через несколько месяцев (McCulloch, Parker, 1957).
Вместе с тем если в качестве донора использовать морских свинок, популяция интенсивно пролиферирующих фибробластов обнаруживается уже через 10—12 дней после эксплантации. Очаги фнбробластоподобных клеток (рис. 7) располагаются в это время на фоне сходящей со стекла популяции гистиоцитов (Р. К. Чайлахян, 1970).
Таким образом, в монослойных культурах костного мозга прикрепившиеся к стеклу гемопоэтические элементы сохраняются недолго. Какова их дальнейшая судьба? Большая часть из них дегенерирует; возможно, что часть незрелых гемопоэтнческнх клеток успевает при этом дифференцироваться в зрелые формы. В целом монослойные культуры не обеспечивают сколько-нибудь длительного поддержания кроветворения in vitro.
Возникает вопрос об источниках клеток, населяющих культуры костного мозга на второй фазе. Происходят лн эти клетки только за счет размножения макрофагов-гистиоцитов, входящих в состав исходного эксплантата, или же в их образовании принимают участие и гемопоэтические элементы, трансформирующиеся в условиях культивирования.
Одна из попыток решить этот вопрос заключалась в изучении кинетики появления клеток второй фазы в монослойных культурах костного мозга крыс (Е. Д. Лурня, О В. Ча-хава, Д. Я. Фриденштейн, 1966).
В монослойных культурах костного мозга крыс через 70 минут—120 часов подсчитывалось количество ядросодержащих клеток и определялось процентное отношение различных клеточных форм: I) макрофагов-гистиоцитов;
2) кроветворных элементов; 3) зрелых полиморфноядер-
Рис. 7. а, 0. Колонии фибробластов п 15 дневной культуре костною мпзга (по А. Я. Фриденштейну, Р. К. Чайлахяну. К. С. Лалыкнной).
них лейкоцитов; 1) дегенерировавших клеток. По процентному содержанию макрофагов гистиоцитов определялось их абсолютное количество в популяции. Анализируя кинетику изменения числа гистиоцнтов-макрофагов в течение первых суток, можно прийти к заключению, что значительная часть этих клеток образуется в результате трансформации кроветворных элементов, так как даже интенсивная пролиферация всех категорий соединительнотканных клеток, имеющихся в исходном материале, не может обеспечить наблюдающегося увеличения абсолютного количества макрофагов-гистиоцитов в культуре.
По данным ряда авторов, клетки второй фазы, возникающие из соединительнотканных и из кроветворных элементов, могут иметь морфологические и гистохимические различия (В. И. Бирюзова и В. Г. Кондратенко, 1967; В. В. Терских, и В. Г. Кондратенко, 1962; Rappay a. oth., 1968; Fazekas а. oth., 1968). Впервые часы и дни среди прикрепившихся к стеклу клеток в культурах костного мозга крыс обнаруживаются в значительном количестве элементы с распластанной, отростчатой цитоплазмой, но имеющие кольцевидную или подковообразную форму ядра. Прикрепившиеся к стеклу клетки оказываются гетерогенными и по данным гистохимического анализа. Так, около одной трети клеток дают положительную реакцию на пероксидазу и щелочную фосфатазу, т. е. содержат ферменты, характерные для мие-лоидных элементов {Rappay a. oth., 1968).
По данным Virolainera и Defendi (1968), макрофаги-гистиоциты в культурах являются потомками стволовых кроветворных клеток. Эти результаты были получены при культивировании кроветворных очагов из селезенки 13—14-дневных радиохимер, восстановленных трансплантацией костного мозга от доноров с хромосомным маркером (ТбТб). Кроветворные очаги радиохимер культивировали на сеточках в органных культурах. На дно сосуда помещали стекло, на которое падали клетки, выселившиеся из эксплантата. Через 3—4 дня культивирования эти клетки подвергали хромосомному анализу. Оказалось, что все делящиеся клетки содержат маркер (ТбТ6), что свидетельствует об их происхождении из клеток костного мозга донора. Важно отметить, что клетки, дающие начало макрофагам, выселяются из грану-лоцитарных и смешанных селезеночных колоний, в то время как эритроидные колонии не содержат предшественников для этих форм. Поскольку каждая колония является клеточным клоном, возникающим из стволовой кроветворной клетки, естественно заключить, что и клетки-предшественники для макрофагов, входящие в состав гранулоцитарных колоний, относятся к потомкам стволовых кроветворных клеток.
. Для изучения динамики образования фибробластоподоб-ных клеток, характерных для третьей фазы развития эксплантатов костного мозга, хорошей моделью служат культуры от морских свинок. В монослойных культурах костного мозга морской свинки через сутки основную массу клеток составляют округлые гистиоцитарные элементы, макрофаги и сегментоядерные лейкоциты. Через 3 суток среди
