Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
2. Длительное культивирование (в течение недель и месяцев), при котором в культурах происходит интенсивная пролиферация клеток; при этом может быть достигнуто зна чительное нарастание клеточной массы. Однако это относится далеко не ко всем разновидностям клеток, входящих в состав кроветворной и лимфоидной ткани. Кроветворение и лимфопоэз в таких культурах обычно быстро прекращаются, и в результате культивирования осуществляется рост лишь тех клеток, которые принято относить к строме кроветворных и лимфоидных органов. Культуры этого типа находят применение в изучении ряда вопросов, связанных с гистогенезами кроветворной ткани, с выделением из нее отдельных клеточных линий и т. д.
3. Культуры, в которых длительное время поддерживают^ размножение и дифференцировка основных категорий кроветворных и лимфоидных клеток, т. е. происходят кроветворение и лимфопоэз. Речь при этом идет не о дозревании уже вступивших на определенный путь дифференцировки клеток отдельных ростков кроветворения, а о поддержании в культуре линии родоначальных клеток, их размножении и развитии в тех же направлениях, которые доступны
для них в условиях целого организма. Однако такие культуры, представляющие основной интерес для решения многих из перечисленных выше задач, не нашли еще до сих пор широкого применения. Это объясняется большими трудностями, возникающими при попытках культивирования кроветворной и лимфоидной ткани с поддержанием in vitro их специфических дифференцировок. В настоящее время поставленная задача оказалась выполнимой при условии применения так называемых методов органного культивирования.
Предлагаемая книга посвящена вопросам, связанным главным образом с использованием длительного культивирования лимфоидной и кроветворной ткани. К ним относится проблема выделения из кроветворной и лимфоидной ткани отдельных клеточных линий, изучения гистогенетических свойств и дифференцировочных возможностей клеток этих линий в различных экспериментальных условиях (в том числе при обратной трансплантации в организм). Особое внимание уделяется вопросу поддержания кроветворения и лимфопоэза в органных культурах и иммунологическим процессам in vitro. Результаты, полученные в краткосрочных культурах, привлекаются лишь в той степени, в которой это необходимо для обсуждения вопросов, которым посвящена основная часть книги.
Кроветворная и лимфоидная ткани составляют в организме во многих отношениях единую систему. Хорошо известно, что степень разделенности этих тканей в кроветворных органах у разных животных не одинакова. В частности, для грызунов (ткани которых чаще всего используются для эксплантации) характерен так называемый лимфоидный тип кроветворения, при котором содержание лимфоцитов в периферической крови и лимфоидных клеток в костном мозге выше, чем у человека. Несмотря, однако, на эту очевидную общность, между кроветворной и лимфоидной тканью есть ряд существенных функциональных и, что особенно важно при эксплантации, гистогенетических отличий. Целесообразно поэтому рассмотреть отдельно проблемы, связанные с культивированием каждой из этих тканей.
Применяемые в настоящее время приемы эксплантации кроветворной и лимфоидной ткани имеют, казалось бы, мало общего между собой. Но если обратиться к истории тканевых культур, то можно увидеть, как один метод возникал из другого. Таким путем легче оценить возможности и ограничения каждого из приемов культивирования.
Принято считать опыты Ру, проведенные в 1885 г., началом метода тканевых культур. Помещая в теплый солевой раствор кусочки медуллярной пластинки куриного эмбриона, Ру удалось сохранить в течение нескольких дней жизнеспособную ткань вне организма. Однако настоящей датой рождения метода тканевых культур является скорее 1907 г., когда Harrison описал легко воспроизводимую технику культивирования ткани, применяя которую он получил не только сохранение жизнеспособной ткани, но и клеточную пролиферацию. Harrison эксплантировал фрагменты, взятые из области медуллярной трубки эмбриона лягушки, в сгусток лимфы лягушки. В этих условиях кусочки переживали несколько недель, в них наблюдались дифференци-ровка нервных клеток и отрастание аксонов. Интересно, что в опытах Harrison использовалась нервная ткань, которая, как это выяснилось в последующие более чем 60 лет, является одним из наиболее трудных объектов для культивирования, так как при ее эксплантации происходит пролиферация в основном глиальных элементов, а для поддержания дифференцировки нейронов требуются специальные условия культивирования. Случилось так, что культуры Harrison, в которых эксплантат помещали в каплю свернувшейся лимфы и был окружен воздухом, оказались перспективными для поддержания сложной дифференцировки нервных клеток.
Harrison предложил легко воспроизводимую изящную методику для выращивания ткани вне организма. Кусочек ткани при эксплантации помещают на покровное стекло в каплю лимфы, которая после свертывания образует вокруг кусочка студенистый сгусток. Покровное стекло (сгустком вниз) накладывают на большое предметное с вышлифованным углублением и герметически замазывают парафином (рис. 1). Эта методика, получившая название «культивирование в висячей капле», применяется до сих пор.
