Кроветворная и лимфоидная ткань - Лурия Е.А.
Скачать (прямая ссылка):
Отдельно от результатов других исследований стоят данные Reisner (1959), полученные в погружных культурах кусочков костного мозга. Хотя эти культуры не относятся к плазменным, рассмотреть результаты, полученные при использовании данного метода, представляется целесообразным в настоящем разделе.
Reisner указывает на возможность длительного (более месяца) поддержания кроветворения в культурах фрагментов костного мозга человека (Reisner, 1959). По его данным, рост фибробластов предотвращается при культивировании костного мозга под глубоким слоем питательной среды.
Эксплантация кусочков костного мозга проводится в специальном сосуде, составленном из покровного стекла и укрепленного на нем стеклянного цилиндра диаметром 18 мм. На покровное стекло, служащее дном сосуда, помещают кусочек костного мозга, покрытый танталовой сеточкой, прижимающей его к стеклу. Сверху наливают питательную среду, содержащую плазму или сыворотку. Решающим фактором в поддержании дифференцировки кроветворных клеток считается глубина слоя среды. Так, при слое среды в 4 мм и меньше наблюдается рост фибробластов, макрофагов и ги-
гантских клеток, тогда как в «глубоких» культурах подавляется рост фибробластов и создаются условия для поддержания гемопоэза. В этом случае, как указывает Reisner, из эксплантатов в течение нескольких месяцев мигрируют дифференцированные клетки костного мозга и крови. В первый месяц происходит выселение всех элементов нормального костного мозга, в том числе и мегакариоцитов, а во второй месяц — зрелых лейкоцитов.
Однако Fames и Trobaugh (1961), используя в своих экспериментах технику Рейснера, не подтвердили эти наблюдения. Фибробластоподобные клетки появлялись регулярно на 2—3-й день культивирования и через неделю составляли преобладающий клеточный тип в культурах. Через 14 дней среди фибробластоподобных клеток изредка встречались единичные кроветворные элементы. При добавлении колла-геназы в среду фибробластоподобные клетки не появлялись, однако основную массу клеток на 10-й день культивирования составляли фагоцитирующие макрофаги и гистиоциты. При этом заметного продления гемопоэза в культурах не наблюдалось.
Billen (1959) использовал методику Рейснера для культивирования фрагментов костного мозга мышей. По его наблюдениям, в культурах происходит постепенное уменьшение количества незрелых кроветворных клеток и увеличение числа макрофагов и фибробластов. С таким изменением клеточного состава костномозговых культур коррелирует и падение кроветворного потенциала эксплантированных клеток.
Действительно, введение смертельно облученным животным костного мозга из культур давало положительные результаты (в смысле предотвращения гибели от острой лучевой болезни) до 4-го дня культивирования. Затем защитный эффект резко падал, и введение клеток; культивировавшихся 9 дней, становилось неэффективным (Billen, 19§9).
Таким образом, для получения долгоживущих культур гемопоэтической ткани метод Рейснера вряд ли является перспективным.
2. МОНОСЛОЙНЫЕ КУЛЬТУРЫ КРОВЕТВОРНОЙ ТКАНИ
В монослойных культурах можно не только следить за изменением морфологии клеток, но и проводить количественный анализ изменения состава эксплантированной клеточной популяции.
SF*
ч
f
mr*
/
v
vA
«0
1ft»' J L?
L
Рис. 5. Клеточный состав монослойных культур костного мозги морской CBIIHKH.
и—3 я»*: 6 — 7 ляс#: в —12 дней; г—12 дней (по А. Я. ФрндсиштсЛну, Р. К- Чайдахяну, К. С. Ладыниной).
. Vf,
; О
ч ^ Ч
V '
При помещении клеток костного мозга в моиослойные культуры к поверхности стекла прикрепляются не все высаженные клетки. Слабой адгезией к стеклу обладают клетки эритроидиого ряда, поэтому при последующих сменах питательной среды большую часть этих форм удаляют.
Моиослойные культуры костного мозга проходят три последовательные фазы развития, каждая из которых имеет свою морфологическую характеристику (рис. 5 и 6) Г-)тн фазы детально описаны для монослойных культур кле-
/ II III
Рис. 6. Три фазы росте в монослойных культурах клеток костного
мозга.
ток костного мозга человека (Berman a. otli.. 1955; Woodliff, 1958). Первая фаза, продолжающаяся в течение первых нескольких дней, характеризуется присутствием полиморфноядерных лейкоцитов и небольшого числа мегакарно-цнтов. Клетки, характерные для второй фазы — макрофаги и гистиоциты, появляются на 2 — 3-н день культивирования и представляют собой округлые, полигональные или веретеновндные элементы 20 — 40 мк в диаметре. В цитоплазме этих клеток выявляются многочисленные вакуоли н гранулы, которые, вероятно, представляют собой материал, образовавшийся в результате фагоцитоза клеточного детрита.
Макрофаги и гнетноцнты в культурах, как правило, не собраны и группы, а располагаются изолированно (см. рис. 5). Начало третьей фазы роста перекрывает конец вто-рои Клетки, характерные для третьей фазы и имеющие морфологию фибробластов, появляются между 6-м и 20-м днем (см. рис. 5 и 6). Они интенсивно размножаются и формируют обширные поля и очаги. По морфологии эти клетки на-
