Культура животных клеток - Конки Д.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка):
Аналитическое и препаративное фракционирование клеток рассмотрено в двух главах, посвященных проточной цитометрии и элютриационному центрифугированию. Методы анализа на клеточном и субклеточном уровнях приведены в главе, посвященной гибридизации in situ. В главе, посвященной органной культуре, подчеркнуто значение клеточных взаимодействий и сохранения гистологической структуры ткани и приведены стандартные методы ведения органной культуры. Наконец, в главе, посвященной определению жизнеспособности клеток и оценке цитотоксичности, рассматриваются проблемы токсикологии и скрининга противоопухолевых препаратов, а также стандартные методы оценки выживаемости клеток в культуре.
Р. Айэн Фрешни
D. Conkie. Beatson Institute for Cancer Research, Wolfson Laboratory for Molecular Pathology, Glasgow, UK.
E. Erba. Istituto di Ricerche Farmacologiche «Mario Negri», Milano, Italy.
R. I. Freshney. Cancer Research Campaign, Department of Oncology, University of Glasgow, Glasgow, UK.
B. Griffiths. PHLS CAMR, Porton, Salisbury, Wiltshire, UK.
R. J. Hay. American Type Culture Collection, Rockville, USA.
I. Lasnitzki. Strangeways Laboratory, Cambridge, UK.
H. R. Maurer. Freie Universitat Berlin, Fachbereich Pharmazie, Institut fur Pharmazie (WEI), Berlin, FRG.
L. Morasca. Istituto di Ricerche Farmacologiche «Mario Negri», Milano, Italy.
A. P. Wilson. Department of Reproductive Pathology, St Mary’s Hospital, Manchester, UK.
АСР —активность, стимулирующая размножение
БВ — бидистиллированная вода БСА — бычий сывороточный альбумин ДМСО — диметилсульфоксид ДЭАЭ —диэтиламиноэтил ИД50 — доза, ингибирующая на 50%
ИДдо — доза, ингибирующая на 90%
ИНТХ — 2- (п-иодофенил) -3- (п-нитрофенил) -5-фенилтетразо-лийхлорид ИФР — инсулино-подобный фактор роста ИЭФ — изоэлектрическая фокусировка ЙУДР — иод-урацилдезоксирибозид JIA4 — лейкоцитарные антигены человека ПГ — простагландин СП Ъ — скорость переноса электронов ТХУ — трихлоруксусная кислота ФИТЦ —флуоресцеин изотиоцианат ФРН —фактор роста нервов
ФРСТ —фактор роста, синтезируемый тромбоцитами ФРФ — фактор роста фибробластов ФРЭ — фактор роста эпидермиса ФСБ — фосфатно-солевой буфер ФЭУ — фотоэлектронный умножитель ХМ —хориоаллантоисная мембрана ЦПЭ — цитопатогенный эффект ЭДТА — этилендиаминтетраацетат
АТСС — американская коллекция типовых культур (Ameri can Type Culture Collection)
БУДР —5-Бромурацилдезоксирибозид DME — минимальная среда Игла в модификации Дюль бекко
IMDM — модифицированная Исковым среда Дюльбекко МЕМ—минимальная среда Игла
ГЛАВА 1
ВВЕДЕНИЕ. ПРИНЦИПЫ СТЕРИЛЬНОЙ РАБОТЫ И ВЕДЕНИЕ КЛЕТОК В КУЛЬТУРЕ
Р. Фрешни
1. Введение
Культивирование клеток и тканей животных к настоящему Времени получило широкое распространение в различных областях исследований, от клеточной и молекулярной биологии, до быстро прогрессирующих прикладных областей биотехнологии. Многие лаборатории располагают руководствами по культивированию клеток, и этот метод является существенной частью многих дипломных работ. Написано немало книг, знакомящих начинающего исследователя с основными принципами получения клеток, сохранения их стерильности и способности к размножению. Данное издание концентрирует внимание читателей на некоторых специальных аспектах, необходимых для более полного понимания проблемы и правильного использования техникн культивирования.
В этой главе будут рассмотрены некоторые общие свойства культивируемых клеток, их биология, получение исходных популяций клеток и описание свойств этих популяций. Здесь же будут приведены основные определения и предположения.
2. Биология клеток в культуре
2.1. Происхождение и характеристика
Список типов клеток, которые в настоящее время можно культивировать, достаточно велик. Это элементы соединительной ткани (фибробласты), скелетные ткани (кость и хрящи), скелетные, сердечные и гладкие мышцы, эпителиальные ткани (печень, легкие, молочная железа, кожа, мочевой пузырь, почки), клетки нервной системы (глиальные клетки и нейроны, хотя последние лишены способности к пролиферации), эндокринные клетки (надпочечники, гипофиз, клетки островков Лангерганса), меланоциты и много различных типов опухолевых клеток (подробнее см. [4]).
Использование маркёров, специфических для данного типа клеток (см. гл. 4), позволяет определять предков, от которых получены такие культуры, но далеко не во всех случаях уда-
ется установить положение клеток в их «родословной». Чтобы ьлетки пролиферировали, они должны происходить скорее от недифференцированных клеток-предшественников, чем от полностью дифференцированных клеток, у которых способность к пролиферации в норме утрачивается. Однако популяция не обязательно должна быть гомогенной и обладать фиксированным фенотипом. Некоторые культуры, например кератиноциты эпидермиса, содержат стволовые клетки, клетки-предшественники и кератинизированные чешуйчатые клетки. В такой культуре происходят постоянное обновление за счет стволовых клеток, пролиферация и созревание клеток-предшественников и терминальная необратимая дифференцировка, сопровождающаяся «слущиванием» чешуйчатых клеток в культуральную среду. Культуры других клеток, например фибробласты, представляют собой относительно однородную популяцию пролиферирующих клеток при низкой плотности монослоя (~104 клеток/см2) и столь же однородную популяцию более дифференцированных, непролиферирующих клеток при высокой плотности монослоя (105 клеток/см2). Эта популяция фиброцит-подобных клеток при высокой плотности монослоя способна к возвращению в клеточный цикл в результате трипсинизации, снижающей плотность клеток в монослое, или соскоба части клеток, приводящего к появлению свободного «края» мопослоя.
