Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Конки Д. -> "Культура животных клеток" -> 5

Культура животных клеток - Конки Д.

Конки Д., Эрба Э., Френши Р., Гриффитс Б. Культура животных клеток — М.: Мир, 1989. — 333 c.
ISBN 5-03-000359-2
Скачать (прямая ссылка): kulturajivotnihkletok1989.djvu
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 < 5 > 6 7 8 9 10 11 .. 136 >> Следующая

В культурах клеток, полученных из опухолей, возможна, по крайней мере частичная, дифференцировка при сохранении способности к пролиферации. Во многих исследованиях используется такая способность опухолевых клеток. Для изучения дифференцировки вполне пригодны клетки мышиной меланомы В16, крысиные гепатомы с минимальными отклонениями [22], клетки нейробластом человека и грызунов [23]. При этом всегда остаются сомнения, можно ли применять полученные результаты к процессам нормальной дифференцировки.
Опухолевые ткани часто могут пассироваться на сингенных хозяевах, и это обеспечивает дешевый и простой способ получения большого количества клеток, хотя полученные популяции
могут быть недостаточно гомогенны. При отсутствии природных хозяев опухоли можно пассировать на бестимусных мышах. Этот метод несколько сложнее, но обладает теми же преимуществами.
Многие другие различия между нормальными и злокачественными клетками аналогичны различиям между ограниченными и постоянными линиями клеток (см. ниже), есть данные
о важности приобретения «бессмертия» в неопластической трансформации клеток [24].
3.3. Субкультивирование
Свежевыделенные культуры носят название первичных культур до начала пассирования или субкультивирования. Клетки первичной культуры обычно гетерогенны и характеризуются малым пролиферативным пулом, но в них наиболее полно представлены типы клеток той ткани, откуда они были получены, а также четко обнаруживается экспрессия ряда свойств, присущих данной ткани. Субкультивирование обеспечивает возможность продления существования культуры (в результате субкультивирования получаются линии клеток), возможность клонирования (см. гл. 4 и 8), исследования и сохранения клеток (гл. 4), а также получения более однородных популяций. При этом во многих случаях субкультивирование приводит к потере специализированных клеток и дифференцировочных признаков, если не принимаются меры для отбора специализированных линий, и сохранения или реиндукции дифференцировочных свойств (см. ниже).
Главным преимуществом получения клеточных линий из первичных культур является наработка большого количества стабильного материала, пригодного для продолжительного использования.
3.3.1. Ограниченные или постоянные клеточные линии!
После нескольких пересевов линия клеток либо гибнет (ограниченная линия клеток), либо «трансформируется» и становится постоянной клеточной линией. Не всегда ясно, возникают стволовые клетки постоянной культуры в ходе пассирования, или они предсуществуют в замаскированной форме в популяции клеток ограниченной линии. Различия в свойствах этих клеток и*большой период времени, предшествующий их появлению (иногда несколько месяцев), позволяют предположить мутационную природу их появления (хромосомные перестройки, транслокации, частичное или полное неспаривание или точечные мутации). Нельзя исключить и возможность предсуществования «бессмертных» клеток, особенно в культурах, полученных из опухолей.
Появление постоянной линии клеток констатируется по морфологическим изменениям (уменьшение размера клеток, снижение их адгезивности, округление и увеличение ядерно/цитоплазматического отношения), по увеличению скорости роста (время удвоения клеток в культуре снижается с 36—48 до 12—
36 ч), по снижению зависимости от сыворотки, по увеличению эффективности клонирования, по снижению зависимости от субстрата (способность пролиферировать в суспензии вырастает так же, как и формирование клонов в агаре), по увеличению гетероплоидности (хромосомные различия между клетками) и анеуплоидности (отличие от донорского эуплоидного кариоти-па) и по увеличению опухолеродности. Черты сходства между спонтанной трансформацией in vitro и злокачественной трансформацией очевидны, но тем не менее нельзя считать эти два процесса идентичными. Нормальные клетки могут трансформироваться в постоянную линию, не становясь при этом злокачественными; из злокачественных опухолей можно получить культуры, которые трансформируются и приобретают указанные выше признаки и при этом становятся более, а иногда менее опухолеродными.
К преимуществам постоянных линий клеток относятся их более высокая скорость роста, возможность достижения более высокой плотности, а следовательно, и большего выхода биомассы, их меньшая зависимость от сыворотки и возможность поддержания в более простых средах, а также их способность к росту в суспензии. К недостаткам этих линий относятся повышенная хромосомная нестабильность, отклонение от фенотипа донора и утрата специфических тканевых маркеров.
3.3.2. Размножение в суспензии
Клетки большинства культур, включая первичные, размножаются в форме монослоя, прикрепившись к стеклу или пластиковому субстрату. Некоторые культуры, главным образом трансформированные клетки, кроветворные клетки и асцитные опухоли, могут размножаться в суспензии. Этим обеспечивается простота размножения (субкультивирование требует только разведения без трипсинизации), отсутствие необходимости увеличения площади поверхности роста наряду с возрастанием объема, простота сбора клеток и возможности получения в случае необходимости «равновесной» культуры (см. гл. 3).
Предыдущая << 1 .. 2 3 4 < 5 > 6 7 8 9 10 11 .. 136 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed