Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
СН, ^",0
сн2
II
с
I
СН,
он
СН,
ТФУ НАс-НС00Н-Н20
ОН R О'С-МН СН -соон
-со,
н
HjN-CH -СООН
Рис. 5.15. Механизм кислотиого отщеплении группы Адпок [75, 76].
t.MKH
Рис. 5.16. Разделение продуктов кислотного отщепления Ад-пок-Trp-OH
методом ВЭЖХ Г75, 76].
Обработка пробы проводилась
смесью 3%-ная трифторуксусная кнслота/метиленхлорнд поп 25 °С, в течение
20 (а) и 40 с (о). Колонка: 250X4 мм (внутр. днаметп); неподвижная фаза:
RP-8, 10 мкм; элю-ент: метанол (90%)/вода (значение pH 5,2 установлено
серной кислотой); объемная скорость: 2,5 мл/мин; давление на входе в
колонку: 120 ат.и; обнаружение: по поглощению прн 280 нм.
1МИН
Рис. 5.17. Отщепление группы Адпок от Адпок-Trp-OH в присутствии смеси
3%-ная трнфторуксусная кнслота/мети-ленхлорид при 25 °С (условия
эксперимента см. в подписи к рис. 5.16) [?5, 76].
а) 6,5 мин
12
8 12
12
1мин
Рис. 5.18. Хроматограммы продуктов, образующихся в результате обработки
Адпок-Trp-Lys-(Бок)-ОН смесью уксусная кислота/муравьиная кислота
(83%)/вода (7:1:2) при 40°С, полученные методом ВЭЖХ (условия разделения
см. в подписи к рис. 5.16) [75, 76].
Выход свободного H-Trp-Lys(BoK)-OH, %: а - 36,48, 6 - 65,99, в -
98,63, Отщепления
группы Ne-5ok не наблюдалось.
19*
292 Глава 5
Таблица 5.9. Скорость снятия защиты Адпок-Trp-OH с использованием
различных кислот (определено методом ВЭЖХ, условия эксперимента см. в
подписи к рис. 5.16) [75, 76]
Кнслотосодержащий Снятие защиты, к\, мнн-1 Ь'
растворитель мин отн
50 % | 99,9%
1 3% ТФУ/СН2С12, 25 °С 0,18 1,78 3,87 590
2 3% ТФУ/СН2С12, 0°С 1,1 11,7 0,63
За Уксусная кислота/83%-ная 10,8 107 6,4-10~2
(по массе) муравьиная 35,5 354 1,95-10-2
кислота/вода (7:1:2 по 34 338 2,00-10"2
обьему), 40 °С
36 То же, что За, но 25 °С
4 Уксусная кислота 80% по
объему, 40 °С
Для сравнения снятие защиты в
растворе 36
Бпок-Рго-ОН, 25 °С 10,5 6,5-10-2 0,30
Ne-BoK-Lys-OH, 25 "С 36 сут. 1.3-10"5 1470
Бок-GIy-OEt, 25 °С 14 сут. 1.3-10-3
Для констант скорости отщепления защитных групп в системе уксусная
кислота/муравьиная кислота/вода (7:1:2) найдены следующие соотношения:
1Ч"-Бок : Адпок : Бпок = от 1 : 600 до 1000 : 1800 и до 2700, N'-Бок
: Адпок : Бпок=от 1 : 1500 : 4900 до 6800.
5.3.1.4. Меланостатин. Гормон, ингибирующий выделение меланотропина,
мелантропин-ингибирующий гормон (МИГ, меланостатин) в последнее время
привлекает все большее внимание в связи с попытками применить его для
лечения болезни Паркинсона [77, 78]. Для контроля за разложением МИГ в
организме необходимы методы, обеспечивающие эффективное
<\ ? р
C-N H-CH-C-NH-CH2-Cn
' сн, nh2
S02 - N
сн H3cy чсн3
Рис. 5.19. Структура N-алкиламинонафтнленсульфовнльных производных МИГ.
Данснл: R н R' = CH3; этансил: R н R'=-CHj- СНз; пропансил: R н R'=-СН2-
CHS-СНа; R и R'^H-бутил; моноизопропансил: R-изопропил, R=H.
Пептидные гормоны 293
Таблица 5.10. Минимальные обнаруживаемые
количества алкиламинонафтиленсульфонильных производных МИГ [54]
Алкиламинонафтиленсульфо- Минимальные об
кильные производные МИГ наруживаемые ко
личества, 10-12 моль
Данснльные 219
Этанспльные 1014
Пропансильные 1217
Бутансильные 3388
Мононзопропансильные 320
разделение и чувствительное обнаружение. Поскольку в молекуле МИГ
отсутствуют сильнопоглощающие аминокислотные остатки, а концевой Pro не
взаимодействует с флуорескамином или фталевым альдегидом, обнаружение МИГ
осуществляют в виде его N, N-диалкиламинонафтиленсульфонильных
производных [54]. Структура изученного N-алкиламинонафтиленсуль-
фонильного производного МИГ показана на рис. 5.19.
Алкиламинонафтиленсульфонильные производные МИГ характеризуются
интенсивной флуоресценцией, что позволяет обнаруживать их при содержании
до 1СН1-lCH моль (табл. 5.10) [54]. Условия разделения этнх соединений
приведены в табл. 5.7.
