Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
<25) УФ (210, 215, 1,4 (ввод 80
Фелипрессин
220) 340 мкл водно
го раствора
Фосфатный буфер (pH 7)/ацетонитрил (4:1) 3 250 УФ (215)
5,6 3
(3 мл/мин)
Фосфатный буфер (pH 7)/ацетоннтрил (33:7) 3 ¦
250 УФ (215) 11,7 3
(3 мл/мии)
Нуклеосил Сц Фосфатный буфер (pH 7)/ацетонитрил (4:1) 3 .
150 УФ (210) 9,5 3
(5 мкм) (2 мл/мин)
Фосфатный буфер (pH 7)/ацетонитрил (3:1) 3 .
150 УФ (210) 2,8 3
(2 мл/мин)
RP-8 (10 мкм) Фосфатный буфер (pH 7)/ацетонитрил (4:1) 3 •'
150 УФ (210) 10,0 3
(2 мл/мин)
Фосфатный буфер (pH 7)/ацетонитрил (4:1) 3X250 УФ (210, 215,
5,6 (ввод 80
220)
340 мкл водно
го раствора
Таблица 5.126. Структуры производных вазопрессина и окситоцина
Структура Название
H-Cys-Tyr-Phe-Glti-Asn-Cys-Pro-Orn-Gly-NH2 Ориипрессии
H-Cys-Phe-Phe-Gln-Asn-Cys-Pro-Lys-Gly-NH2 Фелипрессин
H-Mpa-Tyr-Ile-Gln-Asn-Cys-Pro-Leu-GIy-NH2 Демокси-
тоцин
Таблица 5.13. Влияние концентрации соли на значение к [3]
/1. Неподвижная фаза: иуклеосил Cie (10 мкм); элюент: фосфатный буфер (pH
7)/аце-тч.нитрил (от х : 80 до х ; 20, где *=10, 40, 60 или 80 мл)
Концентра Орнипрес- Лизин-вазо- Окситоцин Фелипрессин Демоксито-
ция фосфа син прессин дин
та в элюен
те, Ш-2 моль/л
0,67 6,3 6,3 10,1 28,5 29,0
2,67 3,0 3,0 8,0 13,0 23,8
4,00 2,4 2,4 7,1 10,4 20,5
5,33 2,3 2,3 7,3 10,0 21,1
Б. Неподвижная фаза: иуклеосил С$ (5 мкм); элюент:
трис(окснтимстил)аминометан
(1 М, pH 10)/ацетоиитрил (3:1)
Концентрация хлорида натрия Ориипрессии Лнзин-вазопрес- Окситоцин
в элюенте, моль/л син
0 оо оо 2,4
0,05 2,2 2,9 2,3
Таблица 5.14. Пределы обнаружения окситоцина и его производных [80]
Колонка: 250X3 мм (внутр. диаметр); неподвижная фаза: RP 8 (10 мкм);
элюент: фосфатный буфер (pH 7,0)/ацетонитрил (4: 1); объем пробы: 34 мкл
(водного раствора); отношение сигнал/шум; 3 : 1
Соединение Коэффициент Предел обнару Длина волны
емкости жения детектора, нм
Окситоцин 3,6 30 210
40 215
Демокситоцин 9,9 75 215
Орнипрессин 1,3 30 215
Лизин вазопрессин 1,3 30 215
20-14S9
306
Глава 5
pH
Рис. 5.23. Влияние pH на флуоресцентную реакцию пробы с окситоцином [2].
Условия реакции: фосфатный буФер+Н3Р04 или NaOH до необходимого значения
pH: 3 мл смеси буфер/ацетонитрнл (80 : 20)+100 мкл раствора окситоцина (5
межд. ед./мл) + +300 мкл флуорескамина (300 мг/100 мл ацетоннтрнла).
Первичные аминогруппы нейрогипофизарных гормонов способны
взаимодействовать с флуорескамином с образованием флуоресцирующих
производных. Однако их флуоресценция сильно зависит от типа применяемого
органического растворителя (рис. 5.22), величины pH элюента (рис. 5.23) и
концентрации флуорескамина (рис. 5.24).
Рис. 5.24. Влияние концентрации флуорескамина на флуоресцентную реакцию с
окситоцином [21].
Условия реакции: 3 мл смесн боратный буфер (pH 8,0)/ацетонитрил (80 :
20)+ 100 мкл раствора окситоцина (5 межд. ед./мл)+300 мкл флуорескамина
(30 мг/ЮО мл ацетоннт-рила).
Пептидные гормоны 307
Слусрссцсн^/'Я
Рис, 5.25. Хроматограмма окситоцина (0,88 мкг в 2 мкл пробы) [2].
Срайнение методов обнаружения по поглощению в УФ-области (при 254 нм) и
