Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
обосновать серологический диагноз заболевания.
3. Учесть результаты РСК, поставленных для дифференциации эпидемического
и повторного сыпного тифа (болезнь Брилла-Цннссера) по данным, полученным
из серологической лаборатории.
Методические указания
Микробиологическая диагностика возвратного тифа
Бактериоскопическое исследование (схема 19). Основной метод лабораторной
диагностики возвратного тифа. У больного во время приступа болезни
(высокой температурной реакции) берут кровь, готовят мазки и окрашивают
фуксином, а также препарат "толстая" капля, который окрашивают по
Романовскому-Гимзе. Borrelia reccurentis представляют собой тонкие
изогнутые нити длиной 8-16 мкм с 4-12 завитками (рис. 81). В мазках они
окрашиваются фуксином в красный цвет, в препарате "толстая" капля - в
фиолетово-розовый.
Биопроба. Кровью больных заражают морских свинок. Через 5-6 дней при
положительном результате в крови животных появляется большое количество
боррелий.
Микробиологическая диагностика риккетсиозов
Материалом для выделения возбудителей при всех видах риккетсиозов служит
кровь, взятая у больного в возможно раннем периоде лихорадки (схема 20).
Однако выделение риккетсий с диагностической целью практически не
производится, поскольку они размножаются только в клеточных культурах и
куриных эмбрионах, а для выделения риккетсий Провацека приходится
предварительно заражать кровью вшей.
Биопроба. Применяется для дифференциации возбудителей эндемических
риккетсиозов от риккетсий Провацека. Для этого самцу морской свинки
внутрибрюшинно вводят кровь боль-
217
ного. При большинстве эндемических риккетсиозов у животных развивается
специфический периорхит, сопровождающийся накоплением риккетсий в
мезотелии влагалищных оболочек яичка.
Для обнаружения риккетсий в переносчиках, органах зараженных животных и
клеточных культурах готовят препараты, окрашивают их по Здродовскому и
микроскопируют. Рик-кетсии Провацека полиморфны. В зависимости от стадии
инфекции, вида клеточной культуры различные морфологические типы
риккетсий обнаруживаются в цитоплазме и ядрах зараженных клеток (рис.
82). Использование иммунофлюорес-центного метода облегчает обнаружение
риккетсий.
Серодиагностика. Серологическое исследование является наиболее
распространенным и доступным методом лабораторной диагностики
риккетсиозов. Оно проводится в реакциях агглютинации, РСК и РПГА (см.
схему 20).
Схема 20. Микробиологическое исследование при риккетсиозах
Материал
Кровь больного, переносчики, органы зараженных животных
Выделение возбудителей
I
Биопроба
1-й этап
2-й этап
"I Г
Препараты, окраска по Здродовскому
Вскрытие животных
Ответ
И ммунофлюорес-центный метод
Сыворотка крови
I I
Введение в жел- Заражение кле- Заражение сам-точный мешок точных куль-
цов морских куриного эмб- тур свинок
риона
т
Серодиагностика
Г
т
Реакция РСК РПГА агглютинации риккетсий
Ответ
1
Препараты из органов, окраска по Здро довскому
Ответ
Ответ
Реакция агглютинации риккетсий применяется для серодиагностики всех
риккетсиозов и характеризуется высокой специфичностью. Реакция ставится в
пробирках с двукратными разведениями исследуемой сыворотки крови (1 :50,1
:100 и т. д.). К каждому разведению сыворотки в объеме 0,25 мл добавляют
по 0,25 мл соответствующего антигена. Через 18 ч инкубации при 37° С
учитывают результаты реакции, не встряхивая про-
218
бирок. Интенсивность реакции обозначают следующим образом: ++++ полное
просветление с нежным мелкозернистым осадком на дне пробирки в виде
зонтика; ++-1- неполное просветление с таким же осадком; ++
незначительное просветление с зернистым осадком; + незначительный
зернистый осадок. Положительной считается реакция, которая проявляется не
менее чем на ++.
РСК ставят по обычной методике (см. с. 121) с использованием
корпускулярных и растворимых антигенов риккетсий. Реакция считается
положительной при задержке гемолиза не менее чем на ++. Специфичность РСК
позволяет дифференцировать риккетсиозы.
РПГА ставят с растворимым риккетсиозным антигеном, адсорбированным на
поверхности эритроцитов. Исследуемые сыворотки разводят от 1 :250 до 1
:64 ООО. В отличие от РСК по РПГА нельзя провести внутригрупповую
дифференцировку риккетсиозов. Однако РПГА позволяет определить фазу
инфекции, поскольку гемагглютинирующие антитела накапливаются в высоком
титре на протяжении инфекционного процесса и титр их быстро падает в
период реконвалесценции, а через 6 мес после выздоровления они не
обнаруживаются. Использование РСК в сочетании с РПГ А позволяет
дифференцировать текущее заболевание от перецесенного в прошлом
(анамнестического).
Серологическое дифференцирование первичного (эпидемического) и повторного
сыпного тифа (болезнь Брилла) основана на образовании при этих двух
формах болезни различных классов иммуноглобулинов - IgM (19S) и IgG(7S)
соответственно. Дифференциация IgM-антител от IgG-антител проводится по
их различной чувствительности к действию 2-меркаптоэтанола, цистеина или
