Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
207
паховую область. Мышей вскрывают через 20 дней после заражения, морских
свинок -через 30. Кусочки органов и лимфатических узлов засевают на
питательные среды для получения чистой культуры и ее идентификации.
Кожно-аллергическая проба (реакция Бюрне). На ладонной поверхности
предплечья внутрикожно вводят 0,1 мл бруцел-лина. При наличии аллергии
уже через 6-8 ч могут появиться гиперемия кожи и болезненная отечность.
Учет реакции производят через 24 ч (см. рис. 50). Реакция чувствительна и
появляется не только у больных и переболевших, но и у вакцинированных
людей, в связи с чем ее диагностическая оценка должна производиться с
осторожностью.
Микробиологическая диагностика сибирской язвы
Возбудитель сибирской язвы - спорообразующая аэробная палочка Вас.
anthracis, относится к семейству Bacillaceae. Наиболее достоверным
методом лабораторной диагностики сибирской язвы является выделение из
исследуемого материала культуры возбудителя. Диагностическую ценность
представляют также реакция термопреципитации по Асколи и кожно-
аллергическая проба.
Методические указания
Бактериоскопическое исследование (схема 17). Изучение окрашенных по Граму
мазков из патологического материала позволяет обнаружить возбудителя,
представляющего собой грамположительную крупную (1-2X6-10 мкм)
неподвижную стрептобациллу. В организме больных и на белковой питательной
среде микробы образуют капсулу (рис. 79), в почве - споры (см. рис. 18).
Бактериологическое исследование. Исследуемый материал засевают на чашки с
питательным агаром, кровяным агаром и в пробирку с питательным бульоном.
Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-20 ч. В бульоне культура Вас.
anthracis растет в виде хлопьевидного осадка; на агаре вирулентные штаммы
образуют колонии в R-форме, имеющие под малым увеличением микроскопа вид
"львиной гривы" или "головы медузы". Авирулентные или слабовирулентные
бактерии образуют S-формы колоний.
Сибиреязвенная палочка обладает сахаролитическими свойствами, не
гемолизирует эритроциты, медленно разжижает желатину (в виде елочки
верхушкой вниз). Под действием пенициллина сибиреязвенные палочки
образуют сферопласты,
208
ct
*
О
CD
О
S4 CD
? S 2 -я я 2
U я
я
Я
c
о
я
w
Ю
2 о " й " о
^S!E R Я О И
s &u-
5 >я я
6 й "
I § s.
Jrt Л О
пП
• E ? Я ь<
3
s
и s
э
я
?
la " . " гз
о о
О (X
в I g2
<u *• Cf Л н (r)
.1 & g'
О о
R
с 5
и
g'5
S
я
*
о.
си
Ч
о
U
S* °
" Я 3 я , х о
е е>;
м >>
,° 2 с. * .. "в Я
я ft к
я ^ s
я . s
S с и
"я
я
я
о
S
я _
<и * о. 9
2 ё
5
о
X в
Ю
О
Q.
С
О
я
UJ
ю
о
(X
с
Б
а
s-
X
§
О
>я
о
я
е
о
ю
в
в.
S
s
9П9
имеющие вид "жемчужин". Это явление используется для дифференциации Вас.
anthracis от непатогенных бацилл.
Биопроба. Исследуемый материал вводят подкожно белым мышам, морским
свинкам или кроликам. Павших животных вскрывают, готовят мазки из крови и
внутренних органов, делают посевы для выделения чистой культуры
возбудителя.
Серодиагностика. При необходимости диагностировать сибирскую язву у
павших животных или у людей, умерших от неизвестной болезни, напоминающей
висцеральную форму сибирской язвы, а также для определения зараженности
сырья (кожа, мех, шерсть) ставят реакцию термопреципитации по Асколи.
Кусочки органов, шерсти, меха измельчают и кипятят в пробирке с
изотоническим раствором хлорида натрия в течение 10-15 мин, после чего
фильтруют до полной прозрачности. Контрольный термоэкстракт готовят из
того же материала, взятого от здорового животного (табл. 42).
Таблица 42. Постановка реакции термопреципитации (форма протокола)
Ингредиенты, мл Опытная проба N° контрольной пробирки
1 2 3 4
Сибиреязвенная преци-
питирующая сыворотка 0,3 - 0,3 0,3 0,3
Нормальная кроличья
сыворотка 0,3 " "
Осторожно наслаивать по стенке пробирки
Испытуемый термоэкстракт 0,3 0,3
Стандартный сибиреязвенный антиген 0,3
Контрольный нормальный термоэкстракт
0,3
Изотонический раствор хлорида натрия - - - - 0,3
Результаты
Ускоренная диагностика сибирской язвы проводится методом
иммунофлюоресценции, который позволяет выявить капсульные формы Вас.
anthracis в экссудате. Мазки из экссудата через 5-18 ч после заражения
животного обраба-
210
Рнс. 80. Лептоспира в темном поле зрения.
тывают капсульной сибиреязвенной антисывороткой, а затем флюоресцирующей
анти-кроличьей сывороткой, меченной'родамином. В препаратах, содержащих
капсульные бациллы, наблюдается желто-зеленое свечение возбудителя.
Кожно-аллергическая проба.
Ставится на внутренней поверхности предплечья - внут-рикожно вводят 0,1
мл антраксина. При положительной реакции через 24 ч появляются гиперемия
и инфильтрат.
Микробиологическая диагностика лептоспирозов
Возбудители лептоспироза относятся к порядку Spirochaeta-les, роду
Leptospira. Патогенные лептоспиры, циркулирующие в нашей стране,
относятся к виду L. interrogans, включающему 18 серогрупп, объединяющих
