Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
Ширина кольца диафрагмы зависит от апертуры объектива, осветительной апертуры конденсора, яркости источника света, от объекта и окружающей его среды. В качестве нормальной может быть принята ширина 3 мм. Около 1 мм должно приходиться на периферийный фильтр и около 2 мм — на центральный фильтр.
Если наружный диаметр темной зоны превышает 16 мм, то применяется иммерсия конденсора. Если центральный фильур слишком мал, то поле зрения имеет цвет периферийного фильтра. Если центральный фильтр слишком велик, то объект виден в цвете центрального фильтра. Освещение недостаточно косо падающим светом вызывает изменение яркости отдельных цветов в поле зрения.
Усиление блеска картины достигается применением вогнутого зеркала, которое в других случаях не должно применяться вместе с конденсором. Периферийный фильтр может быть составлен из разных цветов, например синего и красного. Тогда структурные линии, которые пролегают в одном направлении, выглядят красными, а проходящие перпендикулярно к ним — синими.
Наоборот, комбинация цветов в центральном фильтре ничего не дает.
Для этого метода был изготовлен также «микрополихро-мар» Цейсса (Йена) и «оптиколорконденсор» Рейхерта. В этих приборах были технически очень совершенно объединены сменные центральные и периферийные фильтры с апертурными диафрагмами и апланатическими конденсорами.
В настоящее время эта методика в науке и технике почти не применяется.
Для получения освещения контрастирующими цветами из многочисленных описанных в литературе вспомогательных методов можно рекомендовать следующий.
1. Устанавливают препарат на резкость при обычном освещении по методу светлого поля при соблюдении правила Кёлера (см. главу 4, раздел 4.2).
Для исследования пригодны мелкие неокрашенные объекты, заключенные в воздушную, желатиновую, глицериновую или водную среду. Предметные стекла должны быть не толще 1 мм. Покровные стекла должны иметь толщину, соответствующую применяемому объективу.
Рис. 193. Область периферийного и центрального фильтров (схематически).
1 — диаметр периферийного фильтра; 2 — диаметр центрального фильтра.
Рис. 194. Центральный фильтр (схематически).
Рис. 195. Периферийныи фильтр (схематически).
Рис. 196 Кольцевая диафрагма (схематически).
2. Окуляр вынимают и открывают затянутую ирисовую диафрагму конденсора до тех пор, пока ее диаметр не совпадет с диаметром задней линзы объектива, что можно определить при взгляде в тубус (см. главу 4, раздел 4.2).
3. После этого вынимают конденсор и измеряют диаметр ирисовой диафрагмы в установленном положении. Этот Диаметр должна иметь область центрального фильтра. Весь фильтр должен выглядеть так, как показано на Рис. 194.
4. После этой установки приступают к изготовлению фильтров. Для этого употребляют незасвеченную рентгенов-
скую пленку. Фотографическая пленка слишком тонка и легко сворачивается. Рентгеновские пленки освобождают от слоя бромистого серебра путем обработки в ванне следующим раствором: 100 мл воды + 25 г гипосульфита.
Пленки остаются в ванне до тех пор, пока они полностью не освободятся от желтовато-зеленого слоя серебра. После этого их хорошо промывают и сушат на воздухе. Таким образом получают целлулоидную пленку с двусторонним желатиновым слоем. Возникающая при этом легкая матировка не мешает. Из пленки нарезают круглые пластинки, которые должны точно подходить к держателю диафрагмы. На пластинках очерчивают циркулем или область краевого фильтра, или область центрального фильтра. После этого фильтр с одной стороны окрашивают фотографическими красками Кейлитца.
При изготовлении краевого фильтра предварительно вырезают область центрального фильтра так, что из пластинки получается круг с отверстием посредине.
Красить необходимо с большим количеством воды, в противном случае на желатине получатся мазки краски. Легкая неровность окраски не мешает. Фильтр оставляют сохнуть на воздухе. Для предосторожности он может быть позднее покрыт эфирным раствором коллодия.
Должны быть изготовлены краевые и центральные фильтры всех желаемых цветов, а также многоцветные краевые фильтры (например, красный с синим).
Для каждого объектива должны быть изготовлены отдельные фильтры, так как при употреблении объективов с различной апертурой диаметр центральных и периферийных фильтров должен быть различной величины.
5. На неокрашенные пластинки наклеивают кольцо из черной бумаги шириной в 3 мм. Это кольцо создает затемненную зону между периферийным и центральным фильтрами.
6. Конденсор снова вставляют и фокусировкой устанавливают на такой высоте, чтобы в препарате была резко видна диафрагма осветителя. Диафрагма конденсора должна быть полностью открыта.
7. Затем укладывают целлулоидные фильтры в держатель диафрагмы. Минимально их должно быть три: периферийный фильтр, центральный фильтр и кольцевая диафрагма. В том случае, когда хотят добиться смешения цветов, можно положить друг на друга больше чем три фильтра, вследствие чего поле зрения значительно затемнится. В окуляре препарат виден в контрастирующих цветах.
