Введение в методы микроскопического исследования - Аппельт Г.
Скачать (прямая ссылка):
Если, например, в гистологическом препарате особенно ясно видимым нужно сделать жир, окрашенный в желтый цвет Суданом III, то препарат освещают чистым синим све-
том. Капельки жира выглядят тогда черными и отчетливо выделяются на фоне окружающей среды.
Если нужно выключить какой-нибудь цвет, т. е. добиться того, чтобы он выглядел почти черным, применяют
Рис. 184. Влияние длины волны света, освещаю- '' щего объект, на разрешающую способность. На рисунках изображены шлифы металлов (снимок Народного предприятия Карл Цейсс в Йене), а — масштаб изображения 300 : 1, с последующим двукратным увеличением. Изображение снято при применении желто-зеленого фильтра (А ^ 0,55/z) ; б — то же самое при синем свете (А ** 0,44/i). Особенно четко по сравнению с рис. а видны структуры внутри окружностей.
фильтр строго дополнительного цвета. Если же нужно, наоборот, выделить какой-нибудь цвет и затемнить все остальные цвета, то применяют фильтр того же самого цвета.
Это явление используют, помимо визуальных наблюдений, и в микрофотографии, где в первую очередь все зависит от различий в яркости.
Освещение цветным светом применяют прежде всего при микроскопических исследованиях в проходящем свете по методу светлого поля. При тех же исследованиях в темном поле благодаря избирательной диффракции возникают особые явления, описанные в главе, посвященной микроскопии при освещении по методу темного поля. Цветное освещение падающим светом по методам светлого и темного полей также возможно.
Цветной свет получают различными способами.
1. При помощи светофильтров.
Свет, освещающий объект, пропускают через окрашенные жидкости в плоскопараллельных стеклянных кюветах или, как это теперь чаще делается, через окрашенные стекла, которые помещают по ходу лучей. Эти светофильтры в значительной степени поглощают ту часть спектра, которая не содержит цвет фильтра. Строго красный фильтр пропускает только красный цвет и т. д. Большинство же фильтров не является строго избирательным и пропускает относительно широкую область волн, включающую в себя и часть пограничных цветов.
В случае невозможности приобрести фильтры их изготовляют своими силами. Для изготовления цветных фильтров удобнее всего использовать незасвеченные и непрояв-ленные фотографические пластинки. Можно употреблять также старые пластинки, которые уже непригодны для фотографирования. Путем обработки 20% раствором гипосульфита с пластинок удаляют бромистое серебро, а затем их тщательно промывают и высушивают, как обычный негатив. Таким образом получают стеклянную пластинку, покрытую бесцветным, равномерно распределенным слоем желатины. Из такой пластинки алмазом вырезают фильтры нужного формата. Резать пластинку нужно с обратной стороны. После того как стекло разрезано, отдельные его части остаются еще соединенными между собой слоем желатины. По этим соединяющим прослойкам производят сгибание в противоположных направлениях до тех пор, пока желатиновый слой не разорвется. Для окраски предпочтительно применять недорогие краски Кейлитца, которые имеют кислый характер и поэтому равномерно окрашивают желатину. Можно вполне обойтись набором из трех основных цветов (пурпурный — сине-зеленый — желтый). Путем смешения этих цветов можно получить все необходимые оттенки. Так, например, из желтого и пурпурного получают насыщенный красный цвет; путем сочетания сине-зе-
леного и желтого — насыщенный зеленый. Стекла опускают в растворы красок и время от времени контролируют интенсивность окраски. Когда достигнута нужная степень, стекла споласкивают чистой водой для удаления избытка краски и высушивают. Затем их склеивают попарно
(слой к слою) канадским бальзамом. При отсутствии навыка эта работа довольно трудна. Однако вполне достаточно соединять пластинки попарно, обклеивая их края снаружи полоской липкой бумаги (как при изготовлении диапозитивов).
Обычные красители, которыми пользуются в микроскопической технике, лучше не применять. Во-первых, они не образуют чистых окрашенных растворов и, во-вторых, большая часть этих красителей имеет основной характер. Основные же красители очень плохо окрашивают желатину.
2. При помощи спектральных аппаратов.
О том, как самим сконструировать спектральный аппарат, говорится в главе 4, разделе 4.7.2.
3. При помощи интерференционных фильтров (см. главу 4, раздел 4.3).
4. При помощи вариоколора фирмы Лейтц.
В этом приспособлении гипсовая пластинка лежит между двумя пластинками слюды, которые в свою очередь расположены между поляризатором и анализатором. Путем вращения поляризатора проходящий свет может непрерывно меняться в пределах видимой части спектра. Благодаря этому отдельные детали объекта при совпадении их собственной окраски с дополнительным цветом освещения приобретают большую контрастность. Вариоколор помещается под конденсором микроскопа.
Рис. 185. Вариоколор фирмы Лейтц.
ОСВЕЩЕНИЕ ПО ПРИНЦИПУ ЦВЕТОВЫХ КОНТРАСТОВ ИЛИ ОПТИЧЕСКАЯ ОКРАСКА
10.1. ЧТО ПОНИМАЮТ ПОД ОСВЕЩЕНИЕМ ПО ПРИНЦИПУ ЦВЕТОВЫХ КОНТРАСТОВ ИЛИ ОПТИЧЕСКОЙ ОКРАСКОЙ?