Биологическая химия. Том 31 - Карасев В.А.
Скачать (прямая ссылка):
44 ствии триптофана
6.1.1.5. Изолейции-т-РНК-син- Е. coli 1, ио + иле, АТР, т-РШ\ [120]
45 тетаза 2 ак. ц
6.1.1.9. Валил-т-РНК-синтета- Вас. stearoter- 1, но вал, АТР [69]
за mophilus 2, ак, ц. +
46
47
48
49
50
51
52
6.1.1.10.
6.1.1.20.
6.2.1.5. 6.2.1.9.
6.3.1.2.
6.3.4.2.
Метионин-т-РНК-син-
тетаза
Фенил ал аиии-т-РНК-синтетаза
Сукцииаттиокииаза
Малаттиокиназа
Глютаминсинтетаза
Цитидиитрифосфат-
синтетаза
Синтетаза жирных кислот
Е. coli
Е. coli
дрожжи Е. coli
Pseudomonas М. А.
Е. coli
S. cerevisiae
печень крыс
Е. coli
дрожжи
молочная железа крыс
4 + + метионин, метиоиина- [45]
денилат, т-РНК
(аРЬ + + фенилаланин в при [101]
сутствии т-РНК
(аРЬ + + фенилалаиии [67]
(оф)2 + сукцинат, АТР, КоА [161]
(«Р)4 + + фосфорилироваиие [89]
АТР после обработки
метоксикарбонил-КоА-
дисульфидом
12 + + метионинсульфокси- [137]
мии, АТР
8 + метионинсульфокси- [99]
мин, АТР
8 + метионинсульфоксимин [155]
4 + 6-диазо-5-оксонорлей- [112]
цин
(АзВз)г + [14С]-иодацетамид [125]
(А^з)г + + + S- (4-бром-2,3-дитиобу- [54]
тил)-КоА [146]
синтез 1 моль пальми
тиновой кислоты на
димер
w » Признаки «флип-флоп»-механизма: 1—отрицательная кооперативное™, двухфазная кинетика
2—обратимое связывание 1/2 активных центров
3—необратимое связывание 1/2 активных центров
низма обладает фермент креатинкиназа, который, как считают авторы, является примером асимметричного димера [38]. Иная интерпретация этих данных будет обсуждаться ниже.
3. Гидролазы. В данной таблице представлены 7 ферментов этого класса, четыре из которых относятся к подклассу гид-ролаз ангидридов кислот (3.6.). Представляется удивительным, что практически ни для одного из ферментов обширнейшего подкласса пептигидролаз (3.4) «флип-флоп»-механизм не показан [1]. Одним из первых ферментов, для которых был предложен этот механизм катализа, является относящаяся к классу гидролаз щелочная фосфатаза. Однако в настоящее время именно для этого фермента возможность работы по «флип-флоп»-механизму усиленно оспаривается [36]: Особенностью неорганической пирофосфатазы (3.6.1.1.) является обнаружение «флип-флоп»-механизма фосфорилирования субъединиц в некаталитическом центре [35]. Важным мембранным ферментом, в котором реализуется «флип-флоп»-механизм, или по терминологии авторов, «попеременное™ мест связывания» [50], является Н-АТФ-аза, осуществляющая преобразование энергии цепи переноса электронов в энергию макроэргических связей молекул АТР. Этот же механизм оказался применим и к другим мембранным АТР-азам — Na, К и Са-зависимым [47, 62, 74, 135, 150], подробно рассмотренным также в обзоре [4].
4. Лиазы. Шесть представителей этого класса ферментов осуществляют реакции негидролитического отщепления различных групп (декарбоксилирования, дегидратирования). Обращает на себя внимание наличие в этой группе ферментов с большим числом субъединиц — 12 у ацетоацетатдекарбокси-лазы (4.1.1.4), 8 — дегидратазы 5-аминолевулиновой кислоты (4.2.1.24), по 4 — у остальных ферментов. Тем не менее, в процессе инактивации различными реагентами эти ферменты ведут себя как функциональные димеры и проявляют «реакционную способность половины от числа активных центров».
5. Изомеразы. Этот класс ферментов является наименее изученным в отношении «флип-флоп»-механизма. В нашу таблицу включены лишь два его представителя. При этом необходимо отметить, что наличие «реакционной способности половины от числа активных центров» в Д5-3-оксостероид-изомеразе, обнаруженное в работе [164], подвергается сомнению другой группой авторов [132]. В то же время, данные, полученные на ме-тилмалонил-КоА-мутазе, носят пока косвенный характер. В си-лу этого вопрос о «флип-флоп»-механизме в работе изомераз пока остается открытым.
6. Лигазы. Как и оксидоредуктазы, ферменты класса лигаз относятся к числу наиболее изученных в отношении «флип-флоп»-механизма. В таблице приведено 11 ферментов, причем более половины из них (6 представителей) относятся к группе аминоацил-т-РНК синтетаз. Как правило, для осуществления
синтеза связей большинство лигаз требуют участия макроэрги-ческих соединений типа АТР). Для многих аминоацил-т-РНК-синтетаз существование «реакционной способности половины от числа активных центров» показано более 15 лет назад и хорошо известно. Представляет интерес, что некоторые из них (6.1.1.5, 6.1.1.9) являются мономерами. Однако детальное их изучение выявило наличие двух ковалентносвязанных идентичных аминокислотных последовательностей, а кинетические исследования — двух активных центров, так что фактически они являются димерами [69]. Для ряда ферментов этой группы (6.1.1.20, 6.2.1.5, 6.2.1.9) характерно наличие а- и р-субъединиц, присутствующих в ферменте в четном количестве. Комплекс сф работает при этом как единая функциональная структура. К числу подобных комплексных ферментов относится и синтетаза жирных кислот, также включенная нами в таблицу. Несмотря на большое число стадий, осуществляемых этим ферментом, она ведет себя как димер: при взаимодействии с 14С-иодацетамидом инактивируется только 3 из шести «периферических» SH-rpynn [125], на ферменте одновременно синтезируется только 1 жирная кислота [146]. Последнее утверждение, однако, является предметом острой дискуссии [143],. Следует также отметить, что существуют обоснованные гипотезы о возможности двухфазного механизма и в более сложных структурах, в частности, в комплексах сократительных белков [19].
