Трансформированная клетка - Эш Б.Б.
Скачать (прямая ссылка):
Повышение уровня цАМФ-связывающих белков в дифференцированных клетках нейробластомы связано с необратимым эффектом цАМФ, но не это является причиной необратимости, так как повышение связывания наблюдается в делящихся нейробластомных клетках через 24 ч после обработки PGEj (Prasad et al., 1976) или через 19 ч после обработки дибутирил-цАМФ (Prasad, Rosenberg, 1978). Таким образом, повышение уровня связывающих белков может быть одним из важных событий, существенных для поддержания необратимой нервной дифференцировки (Prasad et al., 1976). В клетках глиомы (Prasad et al., 1976; Walter et al., 1979) и L-клетках (Prasad et al., 1975) после обработки цАМФ-стимулирующими препаратами не наблюдалось повышение уровня цАМФ-связывающих белков. С этим, в частности, связана обратимость действия цАМФ в опухолевых клетках не нейрального происхождения вскоре после удале-
238
ния препарата. Итак, либо в культивируемых клетках крысиной глиомы существует деффект регуляции цАМФ-связывающих белков* либо уровень цАМФ-связывающих белков в клетках глиомы не регулируется цАМФ (Prasad et al., 1976). Однако в других, не нейральных, опухолях, таких, как некоторые опухоли молочных желез, регрессия опухоли после овариоэктомии и лечения дибутирил-цАМФ была ассоциирована с повышением уровня цАМФ-связываю-щих белков (Cho-Chung, Clair, 1977). Это — первое подтверждение in vivo результатов, полученных на культивируемых клетках нейробластомы (Prasad et al., 1975; Prasad et al., 1978; Walter et al.,
1979), о значении цАМФ-связывающих белков для малигнизации.
В развивающейся печени крысы цитозольная фракция и осадок (100 ООО g) имели наибольшую цАМФ-связывающую активность за 3—4 сут до рождения, затем отмечалось ее снижение к моменту рождения и в течение постнатального периода (Lee, Tungmann,
1975). Корреляция изменений цАМФ-связывающей активности и цАМФ-зависимости протеинкиназной активности субклеточных фракций в развивающейся печени отсутствовала. Это дает возможность полагать (Lee, Jungmann, 1975), что измеренная цАМФ-связывающая активность не отражает нарушений регуляторной цАМФ-зависящей субъединицы цАМФ-зависимой протеинкиназы в процессе развития. Возможно, что некоторые из цАМФ-связывающих белков не являются регуляторными субъединицами цАМФ-зависимой протеинкиназы. Интересно, что внутриклеточный уровень цАМФ (Novak et al.* 1972), так же как цАМФ-связывающий белок в цитозоле и осадочных фракциях, повышается в печени 5—10-дневных крысят. Поэтому можно сделать вывод, что цАМФ-связывающий белок в это время облегчает сохранность и компартментализацию циклического нуклеотида (Lee, Jungmann, 1975).
7.12. РЕГУЛЯЦИЯ цАМФ-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ
Возрастание внутриклеточного уровня цАМФ увеличивает уровень цАМФ-связывающих белков в культивируемых клетках мышиной нейробластомы (Prasad et al., 1975b, 1976). Аналогичные исследования проведены и на ином клоне клеток нейробластомы (Prasad, Rosenberg, 1978), клетках нейробластомы человека (Imashuku et al., 1979) а также на мозге крысы в процессе их дифференцировки (Culver et al., 1979). Другие факторы, такие, как рентгеновское облучение и бессывороточная среда (Prasad, 1970; Seeds et aLt 1970), индуцирующие один или более признаков дифференцировки (Prasad, 1975), не повышают уровень цАМФ-связывающих белков (Prasad et al., 1976). Дальнейшие исследования показали, что цАМФ повышает уровень Rj-рецепторных белков, например, в культивируемых гибридных клетках нейробластомы (Walter et al., 1979).
Циклические ГМФ и АМФ связываются с одними и теми же белками, однако цГМФ обладает в 10 раз меньшей аффинностью, чем цАМФ (Prasad et al., 1975b). Этим, возможно, объясняется, в частности, крайне низкий внутриклеточный уровень цГМФ (1/100
239
уровня цАМФ) в клетках нейробластомы (Prasad, 1975). Далее было показано (Ehrlich et al., 1978), что цГМФ и цАМФ одинаково стимулируют протеинкиназную активность, однако необходимая для этого концентрация цГМФ в 10 раз превышала таковую цАМФ. Это позволяет предполагать, что в клетках нейробластомы нет специфических цГМФ-рецепторных белков или протеинкиназ. Однако возможно, что специфические цГМФ-зависимые протеинкиназы или рецепторные белжи не могли быть обнаружены при измерении общей связывающей или фосфорилирующей активности.
7.13. ЗНАЧЕНИЕ цАМФ-СВЯЗЫВАЮЩИХ БЕЛКОВ
Мы предполагали (Prasad et alM 1975b, 1976), что повышение уровня цАМФ-связывающих белков может являться одним из важных внутриклеточных механизмов сохранения высокого уровня цАМФ во время дифференцировки клеток нейробластомы. Результаты исследований показали, что уровни цАМФ и цАМФ-фосфоди-эстеразной активности повышаются в дифференцированных клетках нейробластомы (Prasad, 1975) так же, как в зрелом мозге (Butcher, Sutherland, 1962; Ebadi et al., 1971; Sutherland et al., 1962). Повышенное количество связывающих белков в дифференцированных клетках может служить объяснением увеличения уровня внутриклеточного цАМФ, поскольку цАМФ, связанный с белком, относительно менее чувствителен к ферментативному гидролизу (Prasad ^t al., 1976). Действительно, уровень цАМФ-связывающих белков, в частности белка с молекулярной массой 127 ООО и цАМФ-рецеп-торного белка Rj, повышается в процессе развития мозга крысы, тогда как рецепторный белок Rn снижается с возрастом (Culver et al., 1979).
