Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
селективной, так как подавляет рост многих микро-
46
бов (кишечная палочка и др.) и способствует лучшему росту некоторых
болезнетворных бактерий (возбудители брюшного тифа, паратифов,
дизентерий). Лактозоотрицательные бактерии образуют на этой среде
бесцветные колонии, а лактозоположительные - красные.
Среды для культивирования анаэробов. Среда Вильсона - Блера
(железосульфитный агар). Приготовляется щ питательного агара, к которому
добавляют глюкозу, NaaSCfe, FeCl2 (хлорид железа). Анаэробные клострйдии
(Cl. perfringens) образуют на этой среде колонии черного цвета за счет
восстановления NasSCb в NajS (сульфит натрия), который, соединяясь с
хлоридом железа, дает осадок сульфата железа черного цвета.
Среда Китта - Тароцци. Состоит из питательного бульона, 0,5% глюкозы и
кусочков печени или мясного фарша для адсорбции кислорода. Перед посевом
среду прогревают на кипящей водяной бане в течение 10-15 мин для удаления
воздуха. С целью изоляции от атмосферного воздуха среду заливают
небольшим слоем вазелинового масла.
Тема 8. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ, КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
И ИДЕНТИФИКАЦИИ ЧИСТЫХ КУЛЬТУР АЭРОБНЫХ
И АНАЭРОБНЫХ БАКТЕРИЙ
Чистой культурой называется популяция бактерий одного вида или одной
разновидности, выращенная на питательной среде. Многие виды бактерий
подразделяют по одному признаку на биологические варианты - биовары (син:
биотипы). Биовары, различающиеся по биохимическим свойствам, называют
хемоварами, по антигенным свойствам - сероварами, по чувствительности к
фагу - фаговарами. Культуры микробов одного и того же вида, или биовара,
выделенные из различных источников или в разное время из одного и того же
источника, называют штаммами, которые обычно обозначаются номерами или
какими-либо символами. Чистые культуры бактерий в диагностических
бактериологических лабораториях получают из изолированных колоний,
пересевая их петлей в пробирку с твердой или, реже, жидкой питательной
средой.
Колония представляет собой изолированное скопление бактерий одного вида,
или биовара, выросших на плотной питательной среде в результате
размножения одной или нескольких бактериальных клеток. Колонии бактерий
разных видов отличаются друг от друга по своей морфологии, цвету и другим
признакам.
47
Чистую культуру бактерий получают для проведения диагностических
исследований, которые заключаются в идентификации, т. е. определении
родовой и видовой принадлежности выделенных бактерий. Это достигается
путем изучения их морфологических, культуральных, биохимических и других
признаков (см. схему 1).
Морфологические и тинкториальные признаки бактерий изучают при
микроскопическом исследовании мазков, окрашенных разными методами, и
нативных препаратов.
Культуральные свойства характеризуют питательные потребности, условия и
тип роста бактерий на плотных и жидких питательных средах. Эти свойства
устанавливаются по морфологии колоний и особенностям роста культуры.
Биохимические признаки бактерий определяются набором конститутивных и
индуцибельных ферментов, присущих определенному роду, виду, варианту. В
бактериологической практике таксономическое значение имеют чаще всего
сахаролитические и протеолитические признаки бактерий, которые определяют
на дифференциально-диагностических средах.
Для идентификации бактерий до рода и вида имеют значение пигменты,
окрашивающие колонии и культуры в разнообразные цвета. Например, красный
пигмент образуют Serratia marcescens (палочка чудесной крови), золотистый
пигмент-Staphylococcus aureus (золотистый стафилококк), сине-зеленый
пигмент-Pseudomonas aeruginosa (палочка синезеленого гноя).
Для установления биовара (хемовара, серовара, фаготипа) проводят
дополнительные исследования по выполнению соответствующего маркера -
определению фермента, антигена, чувствительности к фагам.
Программа занятия
1. Получение чистых культур аэробных и анаэробных бактерий.
2. Методы идентификации бактерий, используемые при определении их,
родовой, видовой и типовой принадлежности.
Демонстрация
1. Техника посева петлей, пипеткой, иглой, шпателем.
2. Аппаратура, используемая для культивирования аэробных и анаэробных
бактерий.
3. Характер роста разных бактериальных культур на плотных и жидких
питательных средах, различные типы колоний, "пестрые" ряды бактерий с
разной ферментативной активностью.
4. Методы выделения чистых культур анаэробных бактерий.
48
Задание для выполнения лабораторной работы
1. Выделить чистую культуру аэробных бактерий из исследуемого материала.
2. Идентифицировать выделенную культуру по морфологическим, тинкто-
риальным, культурным и биохимическим свойствам, используя схему 1.
Составить протокол по проведенным исследованиям, как показано в табл. 4.
Методические указания
ТЕХНИКА ПОСЕВОВ И ПЕРЕСЕВОВ
-Универсальным инструментом для производства посевов является
бактериальная петля.^Кроме нее, для посева уколом применяют специальную
бактериальную иглу, а для посевов на чашках Петри-металлические или
