Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Борисов Л.Б. -> "Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии" -> 22

Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.

Борисов Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии — М.: Медицина, 1984. — 256 c.
Скачать (прямая ссылка): rukovodstvoklabzadaniyampomikroekonomiki1984.djvu
Предыдущая << 1 .. 16 17 18 19 20 21 < 22 > 23 24 25 26 27 28 .. 96 >> Следующая

Более точным количественным методом учета отдельных вирусных частиц
является метод бляшек (рис. 33). Культуру клеток заражают вирусом и
покрывают тонким слоем агара. После инкубирования посевов в течение
нескольких суток на агаровом покрытии появляются просветленные участки
определенной формы (бляшки), представляющие собой участки погибших клеток
в сплошном монослое клеточной культуры. Каждая бляшка образуется при
размножении одной вирусной частицы и хорошо заметна в виде круглого
светлого участка на красном фоне клеток, прижизненно окрашенных
нейтральным красным. Титр вируса, установленный этим методом, выражают
числом бляшкообразующих единиц (БОЕ) в 1 мл. Размеры, морфология и сроки
появ-
Рнс. 32. Адсорбция эритроцитов на поверхности клеток, зараженных вирусом
(гемадсорбция).
Рис. 33. Колонии (бляшки) вирусов в клеточной культуре.
а - бляшки вируса ньюкаслской болезни; б - бляшки вируса Коксаки.
59
ления бляшек отличаются не только у разных видов вирусов, но и у
отдельных штаммов одного и Того же вида. Перечисленные признаки
используются для селекции штаммов и получения так называемых чистых линий
вирусов.
Некоторые вирусы можно обнаружить и идентифицировать по включениям,
которые они образуют в ядре или цитоплазме зараженных клеток. Включения
имеют различную форму и размеры от 0,25 до 25 мкм. Они представляют собой
места скопления вирусньпс частиц или реакцию клетки на присутствие в ней
вируса и могут быть выявлены в препаратах, приготовленных из зараженной
ткани и окрашенных по Романовскому-Гимзе или флюорохромами. В последнем
случае используют люминесцентную микроскопию.
Куриные эмбрионы. Куриные эмбрионы по сравнению с клеточными культурами и
подопытными животными значительно реже бывают контаминированы вирусами и
микоплазмами, а также обладают сравнительно высокой жизнеспособностью и
устойчивостью к различным воздействиям. Для получения чистых культур
риккетсий, хламидий и ряда вирусов в диагностических целях, а также для
приготовления разнообразных препаратов (вакцины, диагностикумы)
используют куриные эмбрионы в возрасте от 8 до 12 дней. О размножении
упомянутых микроорганизмов судят по морфологическим изменениям, которые
обнаруживают после вскрытия эмбриона на его оболочках. О репродукции
некоторых вирусов, например гриппа, оспы, можно судить по реакции
гемагглютинации (РГА) с куриными или другими эритроцитами.
К недостаткам данного метода относятся невозможность обнаружения
исследуемого микроба без предварительного вскрытия эмбриона, а также
наличие в нем большого количества белков и других соединений,
затрудняющих последующую очистку риккетсий или вирусов при изготовлении
различных препаратов.
Лабораторные животные. На практике чаще всего используют беспородных
лабораторных животных. Видовая чувствительность животных к определенному
вирусу и их возраст определяют репродуктивную способность вирусов, Во
многих случаях только новорожденные животные чувствительны к тому или
иному вирусу (например, мыши-сосунки - к вирусам Коксаки).
Преимущество данного метода перед другими состоит в возможности выделения
тех вирусов, которые плохо репродуцируются в культуре или курином
эмбрионе. К его недостаткам относятся контаминация организма подопытных
животных посторонними вирусами и микоплазмами, а также необходи-
60
мость последующего заражения клеточной культуры для получения чистой
линии данного вируса, что удлиняет сроки исследования.
Применяют подкожный, внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный,
субдуральный и другие методы заражения лабораторных животных.
Демонстрация
1. Этапы приготовления однослойной клеточной культуры.
2. Цитопатические изменения клеток, вызванные репродукцией в них вируса.
3. Техника заражения вирусами и вскрытие куриного эмбриона.
Задание для иыполнення лабораторной работы
1. Определить репродукцию вируса в клеточной культуре и курином
эмбрионе: а) по ЦПД,- б) с помощью реакции гемагглютинации с куриными
эритроцитами.
Методические указания
Изучение ЦПД вирусов. Для исследования клеток пробирку помещают на
предметный столик микроскопа так, чтобы монослой находился сверху.
Местоположение монослоя клеток в пробирке определяют по черте,
предварительно проведенной карандашом на противоположной стороне.
Морфологические изменения клеток выявляют при микроскопическом
исследовании пробирки с культурой с помощью объектива 8 при опущенном
конденсоре и прикрытой диафрагме. При сравнении клеточного монослоя,
инфицированного вирусом, с незараженными клетками в контрольной пробирке
отмечают полное или островковое разрушение пласта клеток или другие
изменения, которые характеризуют ЦПД вируса.
Заражение куриных эмбрионов. Исследуемый материал вводят в аллантоисную и
амниотическую полости, хорион-аллантоис-ную оболочку или желточный мешок
куриного эмбриона (рис. 34). Перед заражением скорлупу яйца над воздушной
камерой обрабатывают 70% спиртом, обжигают на пламени, смазывают 2%
Предыдущая << 1 .. 16 17 18 19 20 21 < 22 > 23 24 25 26 27 28 .. 96 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed