Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии - Борисов Л.Б.
Скачать (прямая ссылка):
осадок на дне пробирки.
Биохимические признаки. Для определения способности микроорганизмов
ферментировать углеводы (сахаролитические свойства) используют короткий и
длинный "пестрый" ряд. К первому относятся жидкие среды Гисса с моно- и
дисахаридами: глюкозой, лактозой, сахарозой, мальтозой и с шестиатомным
спиртом - маннитом. В длинный "пестрый" ряд наряду с перечисленными
углеводами вводят среды с разнообразными моносахаридами (арабиноза,
ксилоза, рамноза, галактоза и др.), полисахаридами (инулин, крахмал,
гликоген и др.) и спиртами (глицерин, дульцит, инозит и др.). В качестве
индикатора ко всем средам добавляют реактив Андреде или ВР.
Чистую культуру исследуемого микроба засевают петлей в среды "пестрого"
ряда. Посевы инкубируют при 37°С в течение 18-24 ч или более длительно. В
том случае, если бактерии ферментируют углевод до образования кислых
продуктов, наблюдается изменение цвета среды: при разложении углевода до
кислоты и газообразных продуктов наряду с изменением цвета появляется
пузырек газа в поплавке. Если используются среды с полужидким агаром, то
образование газа регистрируется по разрыву столбика. При отсутствии
ферментации цвет среды не меняется. Поскольку бактерии ферментируют ¦не
все, а только определенные для каждого вида углеводы, входящие в состав
сред Гисса, наблюдается довольно пестрая картина, поэтому набор сред с
углеводами и цветным индикатором называют "пестрым" рядом (рис. 30).
54
Для определения протеолитических ферментов производят посев культуры
бактерий уколом в столбик 10-20% желатина, пептонную воду. Посевы в
желатине инкубируют при 20-22° С в течение нескольких дней. При наличии
протеолитических ферментов бактерии разжижают желатин, причем в этом
месте образуется фигура, напоминающая воронку или елочку.
В посевах в пептонную воду определяют продукты расщепления пептона после
инкубирования в течение 2-3 сут при 37°С -ставят реакции на аммиак,
индол, сероводород и др.
Реакция на аммиак. Узкую полоску лакмусовой бумаги укрепляют под пробкой
так, чтобы она не соприкасалась с питательной средой. Посинение бумаги
свидетельствует о наличии аммиака.
Реакция на индол. Способ Эрлиха: в пробирку с культурой бактерий
прибавляют 2-3 мл эфира, содержимое энергично перемешивают и добавляют
несколько капель реактива Эрлиха (спиртовой раствор
парадиметиламидобензаль-дегида с хлористоводородной кислотой). В
присутствии индола наблюдается розовое окрашивание; при осторожном
наслаивании образуется разовое кольцо (см. рис. 35).
Реакция на сероводород. Делают посев культуры бактерий уколом в столбик с
питательной средой, содержащей реактивы для выявления H2S (смесь солей:
сульфат железа, тиосульфат натрия, сульфит натрия). При наличии H2S
происходит почернение агара (см. рис. 35).
Обнаружение каталазы. На предметное стекло наносят каплю 1-3% раствора
перекиси водорода и вносят в нее петлю с бактериальной культурой.
Каталаза разлагает перекись водорода на НгО и Ог. Выделение пузырьков
кислорода свидетельствует о наличии у данного вида бактерий фермента
каталазы.
Результаты работ по идентификации выделенной культуры протоколируют
(табл. 4).
Таблица 4. Характеристика культуры по морфологическим и физиологическим
признакам (форма протокола)
Описание морфоло- Окраска Описание характера роста
Биохимические свойства
Наимено- вание
и другими мето-
рода и
ток бак- ферментация образование
вида куль-
терии дами коло- культуры на питательном
туры
нии 2 2 2 Я h а 2
буль- оне ага- ре о м 2 2 о н м CS о & X а и
Й 5 5 к X X О g X X хл ? ев 5 Й Ьй
55
В бактериологической практике иногда ограничиваются изучением
сахаролитических и протеолитических признаков исследуемых бактерий, если
это является достаточным для их идентификации. В необходимых случаях
проводят изучение других признаков, например восстановление нитратов,
декар-боксилирование аминокислот, образование оксидазы, плазмоко-агулазы,
фибринолизина и других ферментов, а также определение антигенной
структуры, чувствительности к фагам, вирулентности и т. д.
Тема 9. МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ РИККЕТСИЙ
И ХЛАМИДИЙ. МЕТОДЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ ВИРУСОВ
Риккетсии и хламидии - облигатные внутриклеточные бактерии, которые не
растут на искусственных питательных средах. Вирусы также являются
облигатными внутриклеточными микроорганизмами, но они принципиально
отличаются от всех внеклеточных и внутриклеточных бактерий; отсутствием
клеточной организации, ферментов строительного и энергетического
метаболизма, наличием одного типа нуклеиновой кислоты (ДНК или РНК),
неспособностью к бинарному делению.
Для культивирования риккетсий, хламидий и вирусов используют клеточные
культуры, куриные эмбрионы и чувствительных лабораторных животных.
Программа занятия
1. Культивирование риккетсий, хламидий и вирусов в клеточных культурах,
куриных эмбрионах и в организме лабораторных животных.
