Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
Большинство наборов реактивов предназначены для определения одного показателя, но имеются и такие, с помощью которых
46
в биологической жидкости можно устанавливать 2 вещества и более (например, холестерин и мочевую кислоту).
В лабораторной практике широко применяют другие готовые аналитические формы — диагностические полоски, изготовленные на принципах «сухой химии». Они предназначены для качественного, полуколичественного и количественного определения биохимических компонентов в биологических жидкостях. В диагностических полосках все реагенты в твердой фазе нанесены на подложку в необходимом количестве. Нанесенные на подложку химические реагенты вступают в реакцию с исследуемым веществом в растворителе, которым является биологическая жидкость. Фирмы «Лахема» (Чехия»), «Рош Диагностике», «Мерк» (Германия), «Arnes» (США) и др. выпускают экспресс-тесты в виде мо-но- и политестов для исследования в моче pH, кетонов, глюкозы, белка, билирубина, уробилиногена, эритроцитов, гемоглобина, нитратов, удельного веса; в крови — мочевины, глюкозы, псевдо-холинэстеразы. Для количественного определения биохимических показателей с использованием системы «сухой химии» разработаны измерительные приборы — специальные фотометры, флюоресцентные спектроскопы и др. Так, фирма «Эймс» (США) выпускает комплект «Серолайзер», позволяющий определять в крови (сыворотке) гемоглобин и некоторые другие показатели. Фирмой «Рош Диагностике» (Швейцария) разработаны отражательные фотометры и диагностические полоски для определения различных показателей крови. Например, система «Рефлотест» позволяет определять в субстратах количество глюкозы, мочевины, билирубина и его фракций, креатинина, белка, триглицеридов, холестерина, альбумина, активность АлАТ, AcAT, ЛДГ, KK, гамма-ГТ, липазы, щелочной фосфатазы, ионов (фосфора, кальция, аммиака), а также некоторых лекарств (фенобарбитала, теофиллина и др.).
В качестве диагностических полосок применяют многослойные пленки, в которых в качестве подложки используют негнущийся пластик или другой подобный материал. Многослойные пленки, объединенные в слайд, были впервые разработаны фирмой «Кодак» (США). Система «Кодак Эктахем» объединяет слайды и прибор, позволяющие определять в сыворотке крови более 20 биохимических компонентов. Фирма «Optho-Clinical Diagnosties France» (США) выпускает систему «VITROS» для экспресс-диагностики электролитов, ферментов, липидов и иммунодиагностических исследований в моче и сыворотке крови.
Для количественного определения веществ с низкой молекулярной массой (дигостин, фенитоин, фенобарбитал) используют иммуноферментный тест на основе конкуренции.
Недостатками систем «сухой химии» являются высокая стоимость анализа, зависимость выбора метода от производителя, возможность интерференции лекарств.
Источник: 27.
47
3.2. МЕТОДЫ ОБЩЕГО КЛИНИЧЕСКОГО АНАЛИЗА КРОВИ
К методам общего клинического гематологического анализа относят подсчет количества эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов, дифференциальный подсчет лейкоцитов, определение гематокрита, гемоглобина, осмотической резистентности эритроцитов, времени свертывания крови, времени рекальцинации плазмы, скорости оседания эритроцитов (СОЭ), длительности кровотечения и некоторые другие. Анализы выполняют известными (рутинными) методами или используют автоанализаторы.
Подсчет эритроцитов в камере Горяева. Принцип. Точное количество крови равномерно смешивают в определенном количестве жидкости и помещают в камеру с известным объемом, в котором взвесь крови распределяется одним слоем. Дно камеры разграфлено, благодаря чему возможен точный подсчет эритроцитов.
Реактивы: 0,9%-ный раствор натрия хлорида.
Специальное оборудование: микроскоп, камера Горяева, пробирки лабораторные или капилляр от гемометра Сали.
Ход определения. В сухую чистую пробирку вносят 8 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида и капиллярной пипеткой 0,02 мл крови. Предварительно кончик пипетки вытирают, кровь выдувают на дно пробирки, а пипетку тщательно промывают верхним слоем жидкости. Содержимое пробирки хорошо перемешивают. Получают разведение крови 1 : 400, т. е. кровь разбавляют в 400 раз. При сгущении крови ее целесообразно разбавить в 500, 600, 700, 800 раз.
Камера и покровное стекло должно быть вымыты и насухо вытерты. Покровное стекло притирают к камере так, чтобы появились радужные кольца. Берут каплю разведенной крови из пробирки и заполняют ею камеру, нанося к краю покровного стекла. Эритроциты подсчитывают через 1 мин после заполнения камеры под малым увеличением микроскопа (объектив х8, окуляр хЮ или X15) с прикрытой диафрагмой или опущенным конденсатором (в затемненном поле зрения). Эритроциты подсчитывают в пяти больших (или 80 малых) квадратах, расположенных по диагонали. Учитывают эритроциты, лежащие внутри малого квадрата, а также на левой и верхней его стенках. Клетки, находящиеся на правой и нижней линиях квадрата, не считают.
Расчет. Подсчитанное число клеток в 80 малых квадратах умножают на 20 000 при разведении крови 1 : 400, на 25 000 при разведении 1 : 500 или на 30 000 при разведении 1 : 600 и получают окончательный результат в миллионах в 1 мкл. При этом исходят из того, что объем одного малого квадрата равен 1/4000 мкл. Для подсчета клеток віл количество эритроцитов в 1 мкл еще умножают на 1 000 000 (1012/л).
