Методы ветеринарной клинической лабораторной диагнотики - Кондрахин И.П.
ISBN 5-9532-0165-6
Скачать (прямая ссылка):
48
Примечание. Не допускается исследование крови со сгустками;
подсчет клеток тотчас после заполнения камеры (не выжидая 1 мин); использование плохо вымытых и просушенных пипеток и пробирок, недоброкачественных реактивов, вызывающих гемолиз. При соблюдении всех правил подсчета ошибка составит в среднем +2,5 %. Подсчет лейкоцитов в камере Горяева. Принцип. Количество лейкоцитов подсчитывают в определенном объеме камеры с известным разведением крови.
Реактивы: 3%-ный раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим или генцианом фиолетовым из расчета 1 мл 1%-ного водного раствора красителя на 100 мл уксусной кислоты.
Оборудование: микроскоп, камера Горяева,. пробирки, микропипетки или капилляр от гемометра Сали.
Ход определения. От каждого животного целесообразно готовить 2—3 образца разведенной крови. В пробирку вносят 0,4 мл 3 или 5 %-ного раствора уксусной кислоты, подкрашенного метиленовым синим (жидкость Тюрка). Капиллярной пипеткой набирают 0,02 мл крови, конец пипетки тщательно протирают вначале увлажненной, а затем сухой ватой или марлей. Переносят кровь в пробирку, осторожно выдувая. Пипетку ополаскивают жидкостью Тюрка. Кровь в пробирке тщательно перемешивают, закрывают и оставляют стоять на 4 мин, периодически перемешивая содержимое.
Счетную камеру предварительно тщательно обезжиривают спиртом, промывают дистиллированной водой и высушивают под феном, протирают мягкой фланелью. Чистое сухое покровное стекло притирают к камере так, чтобы появились радужные кольца. Кровь в пробирке снова перемешивают стеклянной палочкой, берут каплю крови и наносят к краю покровного стекла камеры. Подсчитывают лейкоциты через 1 мин после заполнения камеры, когда осядут клетки крови, пользуясь малым увеличением микроскопа (объектив X 8, окуляр хЮ) при затемненном поле, для чего опускают конденсор или суживают диафрагму.
Подсчитывают лейкоциты в 100 больших (1600 малых) квадратах.
Расчет. Подсчитанное в 100 больших квадратах число клеток умножают на 50 (разведение крови 1 : 20), получают окончательный результат в тысячах в 1 мкл. Для подсчета клеток віл количество лейкоцитов в 1 мкл умножают на 1000 (109/л).
При подсчете лейкоцитов в камере соблюдают все те же правила, которые изложены в методике подсчета эритроцитов. Ошибка при подсчете составляет в среднем +7 %.
Наиболее вероятные источники ошибок — травмирование тканей ушной раковины при выжимании, выдавливании крови; неравномерное перемешивание крови; не очень чистый микрокапил-
4 — 4196
49
ляр и др. Каждый лабораторный работник должен выявить собственную ошибку путем многократных анализов одной и той же пробы, включая взятие крови.
Клиническое значение определения в крови эритроцитов и лейкоцитов. Родоначальной клеткой для всех форменных элементов крови является стволовая клетка, которая дает начало общей клетке — предшественника миелопоэза и общей клетке — предшественника лимфопоэза. Из клетки — предшественника миелопоэза в миелоидной системе (костный мозг), проходя определенные стадии дифференцировки, образуются эритроциты, тромбоциты, моноциты и зернистые лейкоциты. Из клетки — предшественника лимфопоэза в лимфоидной системе образуются лимфоциты: Т-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции клеточного иммунитета и В-лимфоциты — клетки, обеспечивающие реакции гуморального иммунитета.
Кровь здоровых животных содержит зрелые клетки: эритроциты, тромбоциты, лейкоциты (базофилы, эозинофилы, палочко-ядерные и сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты) и тучные клетки (цвет. рис. I—VII). Появление незрелых промежуточных клеток миелопоэза (ретикулоцитов, нормоцитов, эритро-бластов, миелобластов, миелоцитов и др.) и лимфопоэза (плазмо-бластов, пролимфоцитов, лимфобластов и др.) свидетельствует о развитии патологии кроветворения.
Эритроциты — мелкие клетки крови, содержащие гемоглобин, благодаря чему способны переносить кислород от легких к тканям и углекислый газ от тканей к легким. Зрелые эритроциты млекопитающих — безъядерные клетки, имеют форму двояковогнутого диска. Эритроциты птиц и низших позвоночных — ядерные клетки элипсовидной формы.
В нефиксированном (нативном) препарате эритроциты выглядят как желтоватые округлые образования. В фиксированных и окрашенных мазках крови они обнаруживаются как круглые клетки розового или серовато-розового цвета с просветлением в центре.
Тромбоциты — кровяные пластинки. Это мелкие, безъядерные клетки крови диаметром 5 мкм в количестве от 200 до 900 тыс/мкл, участвуют в свертывании крови. В окрашенных мазках крови они выглядят как мелкие круглые или овальные образования. При снижении их числа наблюдается кровоточивость, развивается гемофилия.
Лейкоциты — разнообразные по морфологическим признакам и функциям клетки сосудистой системы крови. Они выполняют функции защиты организма путем фагоцитарной активности и участия в формировании гуморального иммунитета, в восстановительном процессе при тканевом повреждении. Лейкоциты, в цитоплазме которых содержится специфическая зернистость, называются зернистыми, или гранулоцитами. К ним относятся нейтрофилы (палочкоядерные, сегментоядерные и юные), эозинофилы и базофилы. Незернистые лейкоциты (агранулоциты) характеризу-
