Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии - Хеншен А.
ISBN 5-03-001337-7
Скачать (прямая ссылка):
растворителя снижает коэффициент емкости k в 2-3 раза [13]. Согласно
данным работы [14], степень удерживания небольших пептидов и пептидных
гормонов коррелирует с их суммарной степенью гидрофобности (определенной
из константы распределения в системе окта-нол/вода) для большинства
гидрофобных аминокислотных остатков пептида. Поскольку весьма часто имеют
место различия между предсказанными и экспериментальными значениями
коэффициентов удерживания, автор работы [15] определил их для
аминокислот, пептидов и пептидных гормонов непосредственно из данных,
полученных методом ВЭЖХ. Коэффициенты удерживания аминокислотных остатков
были рассчитаны, исходя из времени удерживания 25 пептидов и пептидных
гормонов. Хроматографирование было осуществлено на колонке с
Пептидные гормоны 263
Таблица 5.2. Рассчитанные коэффициенты удерживания аминокислотных
остатков3 [15]
Аминокислота (N(r)) Коэффици Амниокислота (N6) Коэффици
ент удержи ент удержи
вания вания
pH pH pH pH
7,4 2,1 7,4 2.1
Триптофан (7) 14,9 18,1 Лизии (8) 0,1 ---3,2
Фенилаланин (13) 13,2 13,9 Серии (6) 1,2 ---3,7
Изолейции (4) 13,9 11,8 Аспарагии (5) 0,8 ---1,6
Лейцин (9) 8,8 ю, о; Глутамии (4) ---4,8 ---2,5
Тирозин (11) 6,1 8,2! Аспарагиновая ---8,2 ---5,8
Метионин (9) 4,8 7,11 кислота (5)
Валин (5) 2,7 3,3 Глутаминовая --- 16,9 ---7,5
Пролин (10) 6,1 8,о; кислота (3)
Треонин (5) 2,7 1,5 Амиио- (19) 2,4 ---0,4
Аргинин (7) 0,8 ---4,5 ---СООН (17) ---3,0 6,9
Алаиин (4) 0,5 ---0,1 Амидо- (8) 7,8 5,0
Глицин (13) 0,0 ---0,5' Пироглутамино- (5) --- 1,1 -2,8
Гистидин (5) ---3,5 0,8 Ацетил- (1) 5,6 3,9
Цистин (2) ---6,8 -2,2' Тирозинсульфат (1) 10,9 6,5
а Время удерживания пептидов определено в условиях, приведенных в табл.
5.1. (r) Число пептидов, использованных Для расчета (табл. 5.1).
биорадом ODS при комнатной температуре и элюировании в линейном
градиентом режиме от 0,1 М NaC104, pH 7,4 и 2,1 в начальный момент до 60%
ацетонитрила/0,1 М NaCl04 спустя 80 мин (табл. 5.1). Как уже было сказано
выше, коэффициенты удерживания аминокислотных остатков были рассчитаны
исходя из полученных таким образом данных. Для этого была использована
программа для компьютера, которая последовательно изменяла коэффициенты
удерживания аминокислотных остатков, добиваясь максимальной корреляции
между реальным и предсказанным временем удерживания (табл. 5.2). В
результате суммирования коэффициентов удерживания, приведенных в табл.
5.2, и последующего прибавления к результату t0 (2 мин) было получено
время удерживания ряда пептидов и пептидных гормонов. Как показывает
табл. 5.3, предсказанные и экспериментально найденные значения времени
удерживания достаточно близки.
5.2.2. Ионообменная хроматография
Аминокислоты, небольшие пептиды и пептидные гормоны (содержащие менее 30
аминокислотных остатков) хорошо разделяются методом ВЭЖХ на таких
неподвижных фазах, у которых
ионогенные функциональные группы химически привиты к по-
264 Глава 5
Таблица 5.3. Сравнение рассчитанных и экспериментально установленных
величин времени удерживания3 [15]
Время удер Время удер
живания, живания,
мни мни
Соединение рас- экспе- Соединение рас- экспе-
счи- римеи- счи- римеи-
таи- таль- тан- таль-
иое иое иое ное
(Met) -энкефалин 18,4 19,0 [вещество Р 33,3 29,0
(1_еи)-энкефалин 20,9 22,0 a-MSH 27,3 26,0
АСТН-(5-10) 11,9 17,0 Нейротензин 28,9 24,5
АСТН-(34-39) 27,0 31,0 [Соматостатин 25,5 32,0
АСТН-(4-10) 12,4 20,5 Бомбезин 22,6 26,0
АСТН-(4-11) 33,1 30,0 !Гастрин-1 26,8 28,5
Ангиотензин II 27,4 23,0 АСТН-(18-39) 20,2 30,5
Вещество Р-(4-11) 33,1 30,0 АСТН-П-24) 34,9 21,5
Окситоцин 27,4 23,0 'Мелиттин 61,3 46,0
(Arg^ Вазопрессин 9,0 14,0 Глюкагон 39,7 36,0
(Lys) Вазопрессин 10,2 13.0 ,р-Эндорфин 41,5 34,0
(Arg) Вазотоцин 7,2 12.0 ,|
Величины времени удерживания были рассчитаны следующим образом:
коэффици-енты удерживания, приведенные в табл. 5.2, суммировали для
каждого пептида и прибавляли к полученному результату 2 мин.
листирол-дивинилбензольной матрице. Область применения ионообменных
колонок на основе силикагеля ограничена вследствие химической
