Основы общей и сельско-хозяйственной радиобилогии - Гудков И.Н.
ISBN 5-7987-0005-4
Скачать (прямая ссылка):
При приготовлении микрорадиоавтографов срезов их после обычной процедуры заливки в среду (парафин, эпоксидная смола) и резки наклеивают на предметные стекла и подвергают проводке по общепринятой методике, которая завершается специальной промывкой в 3 %-й хлорной кислоте для удаления остатков меченого соединения, не включившегося в клеточные структуры. Необходимость в последней операции нередко отпадает, так как многие фиксирующие смеси, в частности, приготовленные с добавлением уксусной кислоты, обладают таким свойством. Затем препараты промывают в проточной холодной воде и высушивают.
В последующем на высушенные препараты тем или иным способом наносят фотоэмульсию, экспонируют, как и при приготовлении макрорадиоавтографов в темноте и желательно на холоде, проявляют и получают микрорадиоавтографы, на которых под микроскопом можно обнаружить потемнения определенных участков фотоэмульсии в виде отдельных темных точек, размер которых определяется размером зерен, образуемых ими скоплений или даже возникающих в результате слияния пятен (рис. 52).
Метод авторадиографии позволяет не только выявить локализацию в растении, ткани или клетке меченого соединения, но и его количество, поскольку число зерен восстановленного серебра эмульсии прямо пропорционально количеству воздействующих на него частиц. Количественный анализ макрорадиоавтографов проводят с помощью обычных методов фотометрии, а микрорадиоавтографов — подсчетом под микроскопом зерен, приходящихся на единицу площади или на отдельную структуру, например ядро, хромосому. В последние годы для
Рис. 52. Авторадиография меченых клеточных ядер в меристеме корней гороха при выращивании растений на среде с 8Н-тимидином. Позитивное изображение (увеличение в 1350 раз)
этих целей успешно используется метод цитофотометрии.
Возможности применения метода авторадиографии до конца еще не изучены. С открытием новых фотоматериалов, изобретением новых приборов при сочетании с новыми методическими подходами, например с упоминавшимися хроматографией, электрофорезом и другими, сфера его применения в самых различных областях науки с каждым годом расширяется.
Это относится и в целом к методу меченых атомов. Благодаря широкому его применению за последнюю четверть века, коренным образом возрос уровень многих биологических дисциплин. Метод необычайно ускорил и углубил процесс познания основных закономерностей жизни. Именно благодаря ему получили мощный толчок к развитию такие области биологической науки, как молекулярная и клеточная биология, молекулярная генетика, клеточная инженерия, биохимия, физиология и многие другие.
В радиобиологии меченые атомы также стали эффективным инструментом для решения многообразных сложных проблем. С помощью изотопов, как уже отмечалось, изучаются нарушения процессов метаболизма при лучевом поражении и лучевой болезни организма, закономер-
ности кинетики клеток в критических органах, механизмы действия различных радиомодифицирующих агентов, ход процессов пострадиационного восстановления и многие другие.
Но со всей уверенностью можно сказать, что и сейчас далеко не достигнуты и даже не обозначены границы применимости метода меченых атомов. Ему, особенно в союзе с другими приемами и методами, становятся подвластны все новые и новые области исследований. Совершенно уникальным и необыкновенным методом вооружила ядерная физика биологов.
Контрольные вопросы к главе 10
1. Понятие меченых атомов.
2. Стабильные и радиоактивные изотопы.
3. Изотопы, используемые в агрохимических и физиологических исследованиях.
4. Пути получения меченых соединений.
5. Способы получения меченых удобрений.
6. Требования к качеству меченых удобрений.
7. Понятие удельной активности меченого вещества.
8. Пути применения меченых атомов в исследованиях с растениями.
9. Этапы работы по исследованию транспорта и распределения в растении различных элементов.
10. Этапы работы по изучению роли отдельных веществ в метаболизме растений.
11. Особенности использования стабильных изотопов.
12. Применение изотопа 16N для изучения азотного обмена в растениях.
13. Сущность метода авторадиографии.
14. Достоинства метода авторадиографии по сравнению с другими способами радиоизотопного анализа.
15. Особенности макроавторадиографии и микроавторадиографии.
16. Этапы авторадиографического анализа.
Ионизирующие излучения и радиоактивные изотопы находят все большее применение в различных сферах сельского хозяйства. Есть все основания предполагать, что вместе с достижениями атомной энергетики их использование будет расширяться. Излучение и радиоактивные изотопы обогатят возможности биотехнологий, помогут решить многие прикладные задачи сельскохозяйственного производства и проблемы сельскохозяйственной науки.
Однако бурное развитие атомной энергетики, сопровождающееся увеличением добычи ядерного сырья, эксплуатацией новых предприятий атомной промышленности, испытанием различных ядерных устройств, наконец, растущим объемом работ по утилизации и захоронению радиоактивных отходов, с большей вероятностью может приводить к возникновению чрезвычайных ситуаций, сопровождаемых радиоактивным загрязнением окружающей среды.
