Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Биология -> Гудков И.Н. -> "Основы общей и сельско-хозяйственной радиобилогии" -> 124

Основы общей и сельско-хозяйственной радиобилогии - Гудков И.Н.

Гудков И.Н. Основы общей и сельско-хозяйственной радиобилогии — К.: УСХА, 1991. — 328 c.
ISBN 5-7987-0005-4
Скачать (прямая ссылка): osnoviobsheyiselhoztehniki1991.djvu
Предыдущая << 1 .. 118 119 120 121 122 123 < 124 > 125 126 127 128 .. 129 >> Следующая

При контрастной авторадиографии объект исследования непосредственно контактирует с фотоэмульсией. Существует два основных способа наложения эмульсии. Первый состоит в том, что фотопленка или фотопластинка прикладывается к ровной поверхности образца и прижимается прессом. После экспонирования и проявления радиоавтограф анализируется в проходящем свете путем сравнения плотности почернения фотоматериала. Этот способ является основой метода, получившего название макроавторадиографии.
Второй заключается в непосредственном нанесении на объект расплавленной жидкости фотоэмульсии, которая при застывании образует плотно прилегающий к образцу слой и после экспонирования и фотообработки исследуется вместе с объектом в отраженном, а в случае прозрачности объекта — ив проходящем свете. Обычно он используется для анализа микроскопических объектов и состоит в подсчете следов, образуемых ионизирующими частицами в фотоэмульсии на фоне различных тканевых и клеточных структур с помощью оптического или электронного микроскопа. Этот способ является основой метода микроавторадиографии.
Второй метод обладает значительно более высокой разрешающей способностью, чем первый, так как если для получения макрорадиоавтографов используются фотоматериалы с крупными микрокристаллами — зернами размером 0,2—0,5 мкм (обычные или рентгеновские фотопластинки или фотопленки), то для получения микрорадиоавтографов применяются особые мелкозернистые
ядерные фотоэмульсии с микрокристаллами — зернами размером 0,01—0,02 мкм.
Разновидностью второго способа нанесения эмульсий является метод так называемой «съемной фотоэмульсии». Суть этого метода, получившего широкое распространение во многих модификациях, состоит в том, что полоска эмульсии снимается с подложки и расправляется на поверхности воды. При этом эмульсия набухает и становится эластичной. Объект, например предметное стекло с наклеенными срезами, подводят под пленку эмульсии, вынимают вместе с ней и высушивают. Данный способ исключает разогрев эмульсии до жидкого состояния, что может отражаться на некоторых ее физических свойствах.
Для получения радиоавтографов в растение тем или иным способом, но чаще все же через корневую систему вместе с питательной средой вводят вещество, содержащее радиоактивный изотоп. Для получения макрорадиоавтографов через некоторое время (часы — дни), определяемое задачами и целью исследований, срезают отдельные листья или другие органы или растение полностью, отмывая в случае необходимости корни от земли водой и удаляя остатки воды фильтровальной бумагой. Затем растение или отдельные его части кладут на фильтровальную бумагу, расправляют как для гербария и сверху также накрывают фильтровальной бумагой. Подготовленный таким образом объект помещают между двумя ровными металлическими пластинами и под прессом ставят в сушильный шкаф при температуре 80— 85 °С. После полного высушивания его освобождают от фильтровальной бумаги и в фотографической комнате при слабом темно-красном или специальном желто-зеленом свете накладывают фотопленку или фотопластинку, накрывают мягкой тканью и опять же под прессом помещают в светонепроницаемую камеру или специальную кассету. Последняя операция должна обеспечить максимально возможный контакт растения с фотоэмульсией.
Экспонирование, продолжительность которого зависит от многих факторов, но главным образом определяется количеством поступившего в растение радиоактивного вещества и оценивается экспериментально, составляя обычно дни — недели, но иногда и месяцы, проводят в темном прохладном помещении. Перенос кассеты с места на место при этом недопустим, так как малейшее смещение образца относительно фотоэмульсионного слоя
Рис. 51. Авторадиография распределения 82Р в растении винограда при введении в почву меченого фосфорного удобрения. Негативное изображение (В. И. Кнлияичук и соавторы, 1979)
может исказить радиоавтограф. По прошествии необходимого времени фотопленку или фотопластинку проявляют и получают макрорадиоавтограф, характеризующий распределение радиоактивного изотопа в растении (рис. 51). При необходимости из полученного негатива можно изготовить позитивный отпечаток на фотобумаге.
Нередко возникает потребность получить макрорадиоавтограф из свежего, еще влажного растения (например, при работе с короткоживущими изотопами). В этом случае растительный образец обкладывают водонепроницаемой прокладкой из пропарафинированной бумаги или полимерной пленки (можно просто поместить его в полиэтиленовый пакет) и только тогда помещают на поверхность фотоматериала. Можно, наоборот, обернуть фотопленку или фотопластинку. Главное при этом — не допустить попадания влаги на фотоэмульсию, особенно в месте контакта ее с растением, так как даже незначительное количество влаги будет способствовать при экспонировании диффузии галогенидов серебра из фотослоя в образец и исказит картину радиоавтографа. В последующем с образцом поступают также, как и в первом случае-
Для микрорадиоавтографии обычно используют фик-
сированные препараты отдельных органов или тканей растения, в которые введен изотоп, например кончиков корней, высечек листьев, сегментов стебля и другие. Для фиксации могут быть использованы общепринятые в цитологии и гистологии фиксаторы на основе метилового и этилового спиртов, смеси спирта с уксусной кислотой, хлороформом или ацетоном, не вымывающие включившуюся радиоактивную метку. Но для многих легко растворимых низкомолекулярных меченых соединений, каковыми являются соли элементов питания, и эти фиксаторы оказываются непригодными. Для предотвращения их вымывания используют весьма сложную систему приемов специальной фиксации.
Предыдущая << 1 .. 118 119 120 121 122 123 < 124 > 125 126 127 128 .. 129 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed