Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Физика -> Шлезингер М.А. -> "Люминесцентный анализ" -> 165

Люминесцентный анализ - Шлезингер М.А.

Шлезингер М.А. Люминесцентный анализ — М.: Физ-мат литература, 1961. — 401 c.
Скачать (прямая ссылка): lumiscentniyanaliz1961.pdf
Предыдущая << 1 .. 159 160 161 162 163 164 < 165 > 166 167 168 169 170 171 .. 197 >> Следующая

С Для научно-исследовательских и диагностических целей в вирусологии особый интерес представляют описанные нами выше методы с применением люминесцентно-меченых антител. Эти методы 1201 уже позволили разрешить ряд сложных вопросов, касающихся внутриклеточной локализации и динамики развития вирусных скоплений в клетках. Они привели к разработке методов практического распознавания вирусных инфекций, в частности вируса гриппа [21], и исследования вируса полиомиелита [22}J
Люминесцентной микрТгскопии риккетсий посвящено небольшое число работ; в них показана возможность выявления этих возбудителей при помощи флуорохромирования [23].
С каждым днем расширяется применение люминесцентной микроскопии в бактериологии.
Подавляющее большинство микроорганизмов не обладает сколько-нибудь выраженной и характерной собственной люминесценцией. Только у некоторых бактерий и микроскопических грибов образуются люминес-цирующие пигменты (например, Pseudomonas fluorescens), порфирины и витамины (преимущественно рибофлавин). В этих случаях целесообразно производить исследование собственной люминесценции, во всех же остальных случаях приходится прибегать к флуорохромированию. Например, при изучении препаратов и мазков из тканей и жидкостей, получаемых из организма животных и человека, образцов почв, а также центри-фугатов воды, водных смывов с различных предметов непосредственное флуорохромирование позволяет быстро и надежно обнаруживать в них бактерии и производить их количественный учет. О видовой принадлежности бактерий, выявленных прямым флуорохромированием, без дополнительных исследований судить трудно. Известно, однако, что грам-положительные бактерии обычно связываются с флуорохромом энергичнее и прочнее, чем грам-отрицательные, что и монгет быть использовано
6) .. ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ В ВИРУСОЛОГИИ 319
для их различения. На этом неодинаковом отношении бактерий к флуоро-хромам основаны некоторые из предложенных методов люминесцентномикроскопической диагностики, в частности, так называемых кислотоустойчивых бактерий, например возбудителей туберкулеза [24], проказы и др. Люминесцентно-микроскопическая диагностика оправдывает себя при дифтерии [25, 26] (рис. 79), при заболевании гонорреей [27], при протозойных заболеваниях (малярия, лейшманиоз).
Мейсель с сотрудниками разработали [28] ряд новых методов применения флуорохромирования (преимущественно акридиновым оранжевым) при проведении реакции агглютинации бактерий на стекле (люминесцентная микроагглютинация), для быстрого выявления на мембранных фильтрах молодых, невидимых невооруженным глазом колоний бактерий (5-7-часового возраста) и для обнаружения фа-голизиса этих крайне мелких колоний (рис. 80). Для исследования бактериальных колоний на мембранных фильтрах был использован прием подведения раствора флуорохрома (а также и бактериофага) с тыльной стороны .фильтра (т. е. противоположной той, на которой расположены колонии бактерий), с последующим гашением люминесценции самого фильтра -при помощи фуксина, конго красного, магдалового красного и других красителей. Рис. 79. Бактерии дифтерии при исследовании
В бактериологии, так же, в люминесцентного микроскопе,
как и в вирусологии, наметились существенные сдвиги в применении люминесцентной микроскопии, что связано с введением методов люминесцентно-меченых антител. Исследования в этой области развиваются успешно в нашей стране и в США. В настоящее время показана возможность при помощи этих'методов весьма быстро идентифицировать бактерии даже по единичным клеткам в мазках из смешанных культур бактерий, из органов зараженных животных, из почвы, воды и т. д.
Положительные результаты получены с бактериями дизентерии, сибирской язвы, -брюшного тифа [29], псевдосапа [30] и др.
Попытки применить люминесцентную микроскопию для различения живых и мертвых бактерий до сих пор не могут считаться вполне результативными. Штруггер [3] предложил использовать для этой цели люминесцентную "метахромазию" акридинового оранжевого; однако при проверке однозначных результатов не получилось. По-видимому, следует испытать другие флуорохромы, в частности примулин в комбинации с родамином, и некоторые другие. Примулин сам по себе и в смеси с акридиновым оранжевым дал хорошие результаты для распознавания живых и мертвых дрожжевых клеток [31] и актиномицетов [32].
320 ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ В БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ 1ГЛ. XVIII
Ценные результаты по изучению тонкой структуры микробной клетки получены при помощи флуорохромирования акридиновым оранжевым, аурофосфином и берберином. Мы уже упоминали об исследовании Мейселя и Корчагина [12], обосновавшем цитохимические возможности люминесцентного различения нуклеиновых кислот (ДНК и РНК) и соответствующих нуклеопротеидов. Эти данные получили полное подтверждение в ряде работ [33-35]; показано, что у бактерий, принадлежащих к разным
Рис. 80. Молодые колонии (7-часовые) бактерий дизентерии, подвергающиеся фаголизису (увеличение 80 х). Колонии прижизненно флуо-рохромированы акридиновым оранжевым.
родам и видам, при флуорохромировании акридиновым оранжевым обнаруживается ядерная структура дезоксирибонуклеопротеидной природы. Тем самым можно считать установленным (с учетом цитологических данных, полученных другими методами), что и клетки бактерий имеют четкое деление на ядро и цитоплазму. '
Предыдущая << 1 .. 159 160 161 162 163 164 < 165 > 166 167 168 169 170 171 .. 197 >> Следующая
Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed