Научная литература
booksshare.net -> Добавить материал -> Физика -> Шлезингер М.А. -> "Люминесцентный анализ" -> 163

Люминесцентный анализ - Шлезингер М.А.

Шлезингер М.А. Люминесцентный анализ — М.: Физ-мат литература, 1961. — 401 c.
Скачать (прямая ссылка): lumiscentniyanaliz1961.pdf
Предыдущая << 1 .. 157 158 159 160 161 162 < 163 > 164 165 166 167 168 169 .. 197 >> Следующая

При флуорохромировании жиров и липоидов различными флуорохромами также могут быть выявлены их особенности по специфическому характеру люминесценции. Перспективным здесь следует считать комбинированное использование различных жирорастворителей с флуорохромами. Особый интерес представляют возможности, открываемые при прижизненном флуорохромировании. В этих условиях с большой полнотой и четкостью выявляется богатая структурированность клеток и ядер,
4] ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ в цитологии и гистологии 315
особенности состояния цитоплазмы и ее нуклеопротеидов. Клетки разного возраста, происхождения и функциональной активности отчетливо различаются.
Для выявления ядер, их структуры и физико-химических особенностей наиболее подходят флуорохромы акридинового ряда, и в первую очередь акридиновый оранжевый, акридиновый желтый, аурофосфин и корифосфин как таковые или в комбинации с берберином и основным фуксином. Эти же флуорохромы связываются с цитоплазмой и ее компонентами, обусловливая, однако, их люминесценцию других цветов или оттенков. Цитоплазменные нуклеопротеиды и рибонуклеиновая кислота (РНК) частично отмешиваются и дают комплексы с акридиновыми флуорохромами, светящиеся огненно-красным или оранжевым светом.
("Мейсель и Корчагин [12] на выделенных из клеток нуклеиновых кислотах и их производных показали, что акридиновый оранжевый, связываясь с дезоксирибонуклеиновой кислотой (ДНК) или ДНК-протеидом, придает им ярко-зеленую люминесценцию, в то время как комплексы этого флуорохрома с рибонуклеиновой кислотой (РНК) и ее протеидом люминесцируют красным светом. уГакие соотношения ими были обнаружены в случае прижизненного флуорохромирования клеток. Акридиновый оранжевый в этих условиях оказался весьма полезным цитохимическим реактивом. Аналогичные данные на фиксированных объектах были получены Шюммельфедером [6], а также Берталанфи [47] и Армстронгом [48]. Различная степень связывания акридинового оранжевого с ДНК и РНК зависит, по-видимому, от различной степени полимеризации этих кислот.
Значительное число витальных и суправитальных исследований над флуорохромированными тканями принадлежит Шюммельфедеру [6, 46]. Им установлено, что различные ткани по-разному меняют свое сродство к флуорохромам при повреждении и отмирании. Этот же исследователь удачно использовал флуорохромы для определения изоэлектрической точки для отдельных тканевых и клеточных компонентов.
В области зоологии и физиологии наибольшее значение люминесцентная микроскопия имеет для изучения функционирования отдельных органов животных, а также для определения состояния и жизнеспособности мелких животных, особенно паразитических и их личинок.
Для исследования функционального состояния органов животных в естественных условиях разработаны сцециальные методы витальной люминесцентной микроскопии с использованием различных опак-иллюминаторов и ультрапаков. Ультрафиолетовый или сине-фиолетовый свет, возбуждающий люминесценцию органов, падает на объект сверху, через объектив. В кровь или под кожу животному вводится раствор флуорохрома (на физиологическом растворе) и перемещение этого флуорохрома и его превращения в органе наблюдаются в люминесцентный микроскоп [49]. Этот метод был с успехом применен для изучения функциональной активности печени и почек [50-52] (см. рис. 77), для исследования нервной системы [53] и других органов.
Интересны результаты применения люминесцентной микроскопии к исследованию растительных тканей. В растительных клетках происходит более или менее значительное накопление флуорохромов в вакуолях; оно протекает с разной интенсивностью в зависимости от pH и гН окружающей клетки водной среды, а также от состава веществ, растворенных в вакуолях. Флуорохромы образуют различного типа соедине-
316 ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ МИКРОСКОПИЯ В БИОЛОГИИ И МЕДИЦИНЕ [ГЛ. XVIII
ния с компонентами вакуолей. Вследствие этого и люминесценция вакуолей может существенно различаться [38, 39]. Оболочки растительных клеток хорошо флуорохромируются примулином, тиазоловым желтым,
розоловым красным и магдаловым красным (в последнем случае в комбинации с корифосином).
Прижизненное флуорохромирова-ние растительных тканей и клеток широко используется для цито-физио логических исследований [3, 38] и для определения патологических состояний клеток (рис. 78). В частности, на растительных клетках Штруггером была показана возможность различения живых клеток от поврежденных и отмерших при помощи акридинового оранжевого. Успешным оказалось и применение люминесцентных исследований в радиобиологических опытах [40]. Детальное изучение люминесцентнофункционального состояния растительных клеток недавно провел Александров [41].
Горюнова показала возможность определения состояния жизнедеятельности водорослей по характеру люминесценции хлорофилла в их клетках.
Рис. 77. Прижизненное выделение флуоресцеин-калия (уранина) клетками печени в желчные канальцы (витальное наблюдение над выделительной функцией печени).
микроскопических показателей
Рис. 78. Клетки из чешуйки лука, прижизненно флуорохромиро-ванные акридиновым оранжевым и подвергшиеся плазмолизу;
Предыдущая << 1 .. 157 158 159 160 161 162 < 163 > 164 165 166 167 168 169 .. 197 >> Следующая

Реклама

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed

Есть, чем поделиться? Отправьте
материал
нам
Авторские права © 2009 BooksShare.
Все права защищены.
Rambler's Top100

c1c0fc952cf0704ad12d6af2ad3bf47e03017fed